Metode za določanje števila retikulocitov, klinični pomen. Število retikulocitov (v krvi). Retikulociti so povišani - kaj to pomeni?

Retikulociti so mlade rdeče krvne celice, ki nastanejo po tem, ko normoblasti izgubijo svoje jedro. Značilna lastnost retikulociti je prisotnost v njihovi citoplazmi zrnato-nitaste snovi (retikulum), ki predstavlja agregirane ribosome in mitohondrije.

1.) Štetje števila retikulocitov v brisu po obarvanju s posebnimi barvili.

Ta metoda je v praksi najpogosteje uporabljena metoda zaradi dejstva, da je enostavna, dokaj poceni in ne zahteva posebne drage opreme, zato se lahko uporablja v vsakem klinično diagnostičnem laboratoriju.

Načelo metode temelji na identifikaciji granularno-retikularne snovi retikulocitov med supravitalnim barvanjem z alkalnimi barvami (nasičena raztopina briljantnega krezil modrega v absolutnem alkoholu / raztopina Azur I / raztopina Azur II) z nadaljnjim štetjem v krvnem razmazu. Barvanje retikulocitov se izvaja na steklu ali v epruveti. Štetje poteka z mikroskopom: brisi, pripravljeni z eno od zgornjih metod, se mikroskopsko pregledajo z imerzijsko lečo; v razmazu so retikulociti in eritrociti obarvani rumenkasto-zelenkasto, zrnato-nitasta snov v retikulocitih je modra (ko je obarvana z azurno II in briljantno kresilno modro) ali modrikasto-vijolična (ko je obarvana z azurno I).

2.) Štetje števila retikulocitov s fluorescenčno mikroskopijo.

Ta metoda je preprosta in zahteva malo časa, bolj natančna v primerjavi z običajna metoda, saj fluorescenčna mikroskopija razkrije najmanjša zrnca mrežasto-nitaste snovi, vendar je mogoča le s fluorescenčnim mikroskopom in posebnimi barvili, zato je na voljo le redkim laboratorijem.

Načelo štetja števila retikulocitov s fluorescenčno mikroskopijo temelji na sposobnosti retikulocitne snovi, da fluorescira po obdelavi krvi z akridin oranžnim. Kri zmešamo z akridin oranžno v epruveti ali mešalniku v razmerju 1 del krvi in ​​10 delov barve (mešanico lahko shranjujemo največ 5 ur). Zmes mešamo 2 minuti, kapljico zmesi nanesemo na predmetno stekelce in pokrijemo s pokrovnim stekelcem. V tem primeru tekočina ne sme preseči pokrovnega stekelca.

Mikroskopija z uporabo svetlobnega filtra ZhS-17. V preparatu imajo rdeče krvne celice temno zelene obrise in ne fluorescirajo, v retikulocitih pa mrežasta zrnata snov sveti živo rdeče, kar omogoča enostavno štetje retikulocitov. V krvi, stabilizirani s heparinom ali natrijevim citratom, fluorescence retikulocitov ni opaziti.

3.) Avtomatsko štetje retikulocitov s hematološkim analizatorjem.

V sodobnih hematoloških analizatorjih tehnologija štetja oblikovani elementi krvi temelji na konduktometrični metodi, ki sta jo predlagala H. Wallace in Joseph R. Culter leta 1947. Načelo metode je štetje števila in določanje narave impulzov, ki se pojavijo, ko celica prehaja skozi luknjo majhnega premera (odprtina) , na obeh straneh katere sta dve ločeni od druge elektrode. Vsak prehod celice skozi odprtino spremlja pojav električnega impulza, ki ga zabeleži elektronski senzor. Razdelitev celic v kategorije (eritrociti, levkociti, trombociti, sediment) opravi naprava na podlagi analize amplitude prejetih impulzov.Za določitev koncentracije celic je dovolj, da preide določen volumen vzorca. skozi kanal in preštejte število ustvarjenih impulzov.

Treba je opozoriti, da je poleg klasičnega parametra retikulocitov - relativna (%) vsebnost retikulocitov (RET%, odstotek retikulocitov), ​​določena z metodama 1 in 2 laboratorijske diagnostike, v povezavi s prihodom visoke tehnologije. hematoloških analizatorjih (metoda 3) je postalo mogoče pridobiti (na primer z uporabo patentiranega fluorescentnega barvila za analizator Sysmex-XT-2000i) dodatne informativne parametre retikulocitov:
retikulociti z nizko vsebnostjo RNA, najbolj zreli (LFR%, frakcije retikulocitov z nizko fluorescenco);
retikulociti s povprečno vsebnostjo RNA (MFR%, srednje fluorescenčne frakcije retikulocitov) - frakcija retikulocitov s povprečno fluorescenco);
retikulociti z visoko vsebnostjo RNA (HFR%, frakcije retikulocitov z visoko fluorescenco) - frakcija retikulocitov z visoko fluorescenco);
frakcija nezrelih retikulocitov (IRF%, frakcija nezrelih retikulocitov).

Diferenciacija retikulocitov, ki temelji na stopnji zrelosti in s tem vsebnosti nukleinske kisline, je odraz hematopoetske aktivnosti kostni mozeg.

Metodologija (analizator Sysmex -XT- 2000i). V pretočni celici celice prečkajo žarek polprevodniškega laserja, kar povzroči sipanje žarka pod visokim in nizkim kotom ter vzbujanje fluorescentnega barvila. To omogoča določanje različnih stopenj zrelosti retikulocitov na podlagi vsebnosti RNA v celicah in intenzivnosti njihovega luminiscence. Avtomatsko štetje retikulocitov je zelo natančno (prešteje se več kot 30.000 rdečih krvničk) in ponovljivo (koeficient variacije je približno 6 %). Ta tehnologija zagotavlja natančno štetje retikulocitov tudi pri izjemno nizkih koncentracijah.

> Število retikulocitov

Teh podatkov ni mogoče uporabiti za samozdravljenje!
Potreben je posvet s strokovnjakom!

Zakaj potrebujete štetje retikulocitov?

Število retikulocitov je laboratorijska preiskava krvi, ki ocenjuje učinkovitost eritropoeze. Eritropoeza je proces nastajanja rdečih krvničk v kostnem mozgu. In retikulociti so krvne celice, ki so prehodna oblika med predhodniki rdečega krvne celice, ki nastane v kostnem mozgu, in rdeče krvne celice, ki krožijo v krvnem obtoku. Njihovo število kaže, kako intenzivno poteka proces hematopoeze.

V katerih primerih se štejejo rdeče krvne celice?

Potreba po štetju retikulocitov se pojavi, ko klinična analiza krvi, se odkrijejo znaki anemije ali oslabljene eritropoeze: zmanjšanje ali povečanje števila rdečih krvnih celic ali koncentracije hemoglobina, pojav rdečih krvnih celic nenormalne velikosti ali oblike itd. Študija pomaga diagnosticirati vrsto anemije in spremljati proces njegovega zdravljenja. Štetje retikulocitov se izvaja tudi za spremljanje učinkovitosti kemoterapije in radioterapije pri tumorjih kostnega mozga.

Kdo se lahko naroči na test in kje ga lahko opravi?

Analizo lahko predpiše splošni zdravnik, pediater, hematolog, specialist za nalezljive bolezni, kirurg ali ginekolog. Izvaja se v javnih klinikah in zasebnih zdravstvenih centrih, ki zbirajo kri za laboratorijske preiskave. Za štetje retikulocitov vzamemo kri iz prsta ali vene in jo pregledamo pod mikroskopom ali s hematološkim analizatorjem. Rezultat analize je pripravljen naslednji dan.

Kako se pripraviti na raziskavo?

Na rezultat analize lahko vplivajo nekatera nesteroidna protivnetna zdravila, fluorokinolonski in tetraciklinski antibiotiki, derivati ​​nitrofurana, pomirjevala, tireostatiki in druga zdravila. Zato je dan pred študijo priporočljivo prenehati jemati zdravila, po predhodnem dogovoru o njihovem enodnevnem odvzemu z zdravnikom. Priporočljivo je, da 2-3 ure pred odvzemom krvi ne jeste in ne kadite. Lahko piješ čisto vodo brez plina.

Kakšno število retikulocitov velja za normalno?

IN absolutne vrednostiŠtevilo retikulocitov pri ženskah mora biti 17–63,8 x 10^9/l, pri moških pa od 23 do 70 x 10^9/l. V odstotkih retikulociti predstavljajo od 0,5 do 1,9% celotnega števila rdečih krvnih celic. Večina veliko število pri novorojenčkih opazimo nezrele rdeče krvne celice (po različnih virih od 5 do 15%). S starostjo se njihovo število postopoma zmanjšuje. Povečanje števila retikulocitov opazimo pri nosečnicah, kadilcih in plezalcih.

Katere bolezni lahko kažejo odstopanja od norme?

Povečanje števila retikulocitov imenujemo retikulocitoza, zmanjšanje pa retikulocitopenija. Raven retikulocitov sama po sebi ni osnova za postavitev kakršne koli diagnoze, vendar omogoča zdravniku, da natančneje domneva, kateri patološki proces se pojavi v telesu.

Opazimo zmanjšanje števila retikulocitov ali celo njihovo popolno odsotnost različni tipi anemija (hipoplastična, aplastična, sideroblastna, zaradi pomanjkanja železa, folna kislina, vitamin B12), s tumorskimi zasevki v kosti, med zdravljenjem s citostatiki, radiacijsko boleznijo in obsevanjem.

Vzroki retikulocitoze so lahko hemolitična anemija (v tem primeru število retikulocitov doseže 60 odstotkov ali več), akutna izguba krvi (retikulocitna kriza se pojavi 3-4 dni po njej), malarija, policitemija, antianemično zdravljenje, akutno pomanjkanje kisik. Povišano število retikulocitov lahko kaže na okultno krvavitev (na primer pri ljudeh z peptični ulkus).

Odkrivanje granularno-retikularne snovi retikulocitov pri barvanju z briljantno-krezilno modro brez predhodne fiksacije.

Reagenti:

1% raztopina briljantnega krezil modrega: 50 mg barvila raztopimo v 5 ml fiziološka raztopina in dodamo 20 mg natrijevega citrata (raztopino hranimo v temni stekleni posodi, primerno za nekaj dni).

Metodologija:

Na predmetno stekelce z vdolbinico nanesite 2 kapljici 1% raztopine briljantne krezilno modre barve in 1 kapljico krvi. Previdno premešamo s stekleno paličico in zmes postavimo v vlažno komoro (petrijevka, v katero po robovih položimo rahlo navlažene zvitke gaze ali vate) za 30 minut na sobni temperaturi. Nato se naredijo razmazi in posušijo.

Število retikulocitov:

V razmazih so rdeče krvne celice obarvane rumenkasto-zeleno, zrnato-retikularna snov v retikulocitih pa je modra in vijolična.

Brise mikroskopsko pregledamo z imerzijsko lečo. Retikulociti se štejejo na 1000 rdečih krvnih celic (večja natančnost je dosežena pri štetju 2000-3000 rdečih krvnih celic).

Povečanje števila retikulocitov opazimo pri:

stimulacija eritropoeze (izguba krvi, hemoliza, retikulocitna kriza z uspešnim zdravljenjem anemije zaradi pomanjkanja B12, akutno pomanjkanje kisika).

Zmanjšanje števila retikulocitov opazimo pri:

zaviranje eritropoeze (aplastična in hipoplastična anemija, nezdravljena anemija zaradi pomanjkanja B12, metastaze raka v kosteh),

bolezni ledvic, endokrinih bolezni.

Opazimo povečanje njihovih retikulocitov v periferni krvi (retikulocitoza): pri hemolitični anemiji (število retikulocitov lahko doseže 60% ali več (zlasti močno se poveča med hemolitično krizo); pri akutni izgubi krvi (retikulocitna kriza se pojavi 3–5 let). dni po izgubi krvi), med drugim povečanje retikulocitov omogoča sum na skrito krvavitev (na primer pri bolnikih s peptično razjedo prebavila, tifus); za malarijo; s policitemijo; pri zdravljenju anemije zaradi pomanjkanja železa z železom (nekaj dni (3 - 10) po začetku antianemičnega zdravljenja perniciozna anemija); z akutnim pomanjkanjem kisika; s tumorskimi metastazami v kostnem mozgu. Ne smemo pozabiti, da lahko v primeru povečanega uničenja rdečih krvnih celic delež retikulocitov preseže 50% zaradi umetnega povečanja števila retikulocitov (kot smo že omenili, se delež retikulocitov izračuna kot odstotek vseh rdeče krvne celice). V takih primerih se za oceno resnosti anemije uporablja "retikularni indeks", ki se izračuna po formuli: (% retikulocitov x hematokrit) / 45 x 1,85, kjer je 45 normalni hematokrit, 1,85 je število dni. potrebnih za vstop novih retikulocitov v kri. Če indeks

METODE ZA ŠTETJE ŠTEVILA RETIKULOCITOV

(1) Štetje števila retikulocitov v brisu po obarvanju s posebnimi barvili. Ta metoda je v praksi najpogosteje uporabljena zaradi dejstva, da je enostavna, dokaj poceni in ne zahteva posebne drage opreme, zato se lahko uporablja v vsakem klinično diagnostičnem laboratoriju. Načelo metode temelji na identifikaciji granularno-retikularne snovi retikulocitov med supravitalnim barvanjem z alkalnimi barvami (nasičena raztopina briljantnega krezil modrega v absolutnem alkoholu / raztopina Azur I / raztopina Azur II) z nadaljnjim štetjem v krvnem razmazu. Barvanje retikulocitov se izvaja na steklu ali v epruveti. Štetje poteka z mikroskopom: brisi, pripravljeni z eno od zgornjih metod, se mikroskopsko pregledajo z imerzijsko lečo; v razmazu so retikulociti in eritrociti obarvani rumenkasto-zelenkasto, zrnato-nitasta snov v retikulocitih je modra (ko je obarvana z azurno II in briljantno kresilno modro) ali modrikasto-vijolična (ko je obarvana z azurno I). (2) Štetje retikulocitov s fluorescenčno mikroskopijo. Ta metoda je enostavna in zahteva malo časa, je bolj natančna od klasične metode, saj fluorescenčna mikroskopija razkrije najmanjša zrnca mrežasto nitaste snovi, vendar je možna le s fluorescenčnim mikroskopom in posebnimi barvili, zato je na voljo samo v nekaj laboratorijih. Načelo štetja števila retikulocitov s fluorescenčno mikroskopijo temelji na sposobnosti retikulocitne snovi, da fluorescira po obdelavi krvi z akridin oranžnim. Kri zmešamo z akridin oranžno v epruveti ali mešalniku v razmerju 1 del krvi in ​​10 delov barve (mešanico lahko shranjujemo največ 5 ur). Zmes mešamo 2 minuti, kapljico zmesi nanesemo na predmetno stekelce in pokrijemo s pokrovnim stekelcem. V tem primeru tekočina ne sme preseči pokrovnega stekelca. Mikroskopija z uporabo svetlobnega filtra ZhS-17. V preparatu imajo rdeče krvne celice temno zelene obrise in ne fluorescirajo, v retikulocitih pa mrežasta zrnata snov sveti živo rdeče, kar omogoča enostavno štetje retikulocitov. V krvi, stabilizirani s heparinom ali natrijevim citratom, fluorescence retikulocitov ni opaziti. (3) Avtomatsko štetje retikulocitov z uporabo hematološkega analizatorja. V sodobnih hematoloških analizatorjih tehnologija štetja krvnih celic temelji na konduktometrični metodi, ki jo je predlagal H. Wallace in Joseph R. Culter leta 1947. Načelo metode je štetje števila in določanje narave impulzov, ki nastanejo, ko gre celica skozi luknjo majhnega premera (odprtino), na obeh straneh katere sta dve elektrodi. izolirani drug od drugega. Vsak prehod celice skozi odprtino spremlja pojav električnega impulza, ki ga zabeleži elektronski senzor. Razdelitev celic v kategorije (eritrociti, levkociti, trombociti, sediment) opravi naprava na podlagi analize amplitude prejetih impulzov.Za določitev koncentracije celic je dovolj, da preide določen volumen vzorca. skozi kanal in preštejte število ustvarjenih impulzov. Treba je opozoriti, da je poleg klasičnega parametra retikulocitov - relativna (%) vsebnost retikulocitov (RET%, odstotek retikulocitov), ​​določena z metodama 1 in 2 laboratorijske diagnostike, v povezavi s prihodom visoke tehnologije. hematoloških analizatorjih (metoda 3) je postalo mogoče pridobiti (na primer z uporabo patentiranega fluorescentnega barvila za analizator Sysmex -XT-2000i) dodatne informativne parametre retikulocitov: retikulociti z nizko vsebnostjo RNA, najbolj zreli (LFR%, nizka fluorescenca retikulocitne frakcije); retikulociti s povprečno vsebnostjo RNA (MFR%, srednje fluorescenčne frakcije retikulocitov) - frakcija retikulocitov s povprečno fluorescenco); retikulociti z visoko vsebnostjo RNA (HFR%, frakcije retikulocitov z visoko fluorescenco) - frakcija retikulocitov z visoko fluorescenco); frakcija nezrelih retikulocitov (IRF%, frakcija nezrelih retikulocitov). Diferenciacija retikulocitov glede na stopnjo zrelosti in s tem vsebnost nukleinskih kislin je odraz hematopoetske aktivnosti kostnega mozga. Metodologija (analizator Sysmex -XT- 2000i). V pretočni celici celice prečkajo žarek polprevodniškega laserja, kar povzroči sipanje žarka pod visokim in nizkim kotom ter vzbujanje fluorescentnega barvila. To omogoča določanje različnih stopenj zrelosti retikulocitov na podlagi vsebnosti RNA v celicah in intenzivnosti njihovega luminiscence. Avtomatsko štetje retikulocitov je zelo natančno (prešteje se več kot 30.000 rdečih krvničk) in ponovljivo (koeficient variacije je približno 6 %). Ta tehnologija zagotavlja natančno štetje retikulocitov tudi pri izjemno nizkih koncentracijah.

Retikulocitopenija in retikulocitoza, vzroki za razvoj, diagnostična vrednost njihovega odkrivanja.

studfiles.net

Retikulociti (reticulocytus)

Retikulociti so mlade rdeče krvne celice, ki nastanejo po tem, ko normoblasti izgubijo svoje jedro.

Značilna lastnost retikulocitov je prisotnost zrnate mrežaste snovi, ki se pojavi s supravitalnim obarvanjem, to je brez predhodne fiksacije celic.

Elektronska mikroskopija je pokazala, da so zrnate mrežne strukture ostanki endoplazmatskega retikuluma, ribosomov in mitohondrijev, ki vsebujejo RNA. V retikulocitih se v majhni meri sintetizirajo beljakovine (globin), hem, purini, pirimidinski nukleotidi, fosfatidi in lipidi, vendar se v njih ne sintetizira RNA. 2 dni ostane retikulocit v krvnem obtoku, nato pa, ko se RNA zmanjša, postane zrel eritrocit.

V brisih, obarvanih s konvencionalnimi hematološkimi metodami, so retikulociti sivkasto rožnate barve – polikromatofilni, tj. pobarvan z različnimi barvami.

Trenutno se uporablja enotna metoda za štetje števila retikulocitov po njihovem obarvanju

• briljantno krezilno modra,
• Azure I oz
• Azure II neposredno na steklu ali v epruveti.

1. Načelo metode

Odkrivanje granularno-retikularne snovi eritrocitov pri barvanju z alkalnimi barvami z njihovim nadaljnjim štetjem v krvnem razmazu.

2. Reagenti:

a) nasičena raztopina briljantnega kresil modrega v absolutnem alkoholu (za pripravo absolutnega alkohola morate namočiti 96% etanol v več spremembah žganega bakrovega sulfata v prahu): 1,2 g barve na 100 ml alkohola;

b) raztopina azur I: azur I - 1 g, amonijev oksalat - 0,4 g, natrijev klorid - 0,8 g, etanol 96% - 10 ml, destilirana voda - 90 ml. Raztopino barve v zaprti steklenici postavimo v termostat pri 37 °C za 2–3 dni in občasno močno pretresemo. Nato ohladimo na sobno temperaturo in filtriramo skozi papirnati filter. Raztopina je shranjena v temni stekleni posodi. Če se pojavi usedlina, je treba barvo ponovno filtrirati;

c) Raztopina Azur II: Azur II - 1 g, natrijev citrat - 5 g, natrijev klorid - 0,4 g, destilirana voda - 45 ml. Raztopino pustimo v termostatu pri 37 °C 2 dni, občasno premešamo. Da bi pospešili raztapljanje, lahko barvo segrevamo na majhnem ognju 15–20 minut, ne da bi zavreli. Ohladimo na sobno temperaturo in filtriramo. Shranjujte v temnih steklenih posodah.

3. Barvanje

Barvanje na steklu:

• dobro oprano in razmaščeno stekelce segrejemo nad plamenom gorilnika. S stekleno paličico nanesemo kapljico enega od barvil na steklo in z brušenim steklom pripravimo madež barve. S steklografom označite stran stekla, na katero je nanešena poteza barve. V tej obliki lahko steklo pripravimo za prihodnjo uporabo in ga shranimo v suhem in temnem prostoru;
• Na tako pripravljeno steklo nanesemo kapljico krvi, naredimo tanek razmaz in steklo takoj postavimo v vlažno komoro. Za to uporabite petrijevko s pokrovom, v katero po robovih položite rahlo navlažene zvitke gaze ali vate;
• Brise hranimo v vlažni komori 3–5 minut in nato posušimo na zraku. Zrnata mrežasta snov retikulocitov je pobarvana vijolično modro in jasno izstopa na zelenkasto modrikastem ozadju eritrocitov.

In vitro barvanje:

• metoda 1: pred uporabo v epruveti pripravimo delovno raztopino briljantnega krezil modrega na osnovi kapljice 1% raztopine kalijevega oksalata 4 kapljice raztopine barve 1. Barvi dodamo 40 μl krvi (dve pipeti do oznake 0,02). ). Mešanico temeljito, a nežno premešamo in pustimo 30 minut. Mešajte in pripravite tanke namazke;
• metoda 2: 0,05 ml raztopine barvila 3 in 0,2 ml krvi damo v epruveto. Zmes temeljito premešamo in pustimo 20-30 minut. Mešajte in pripravite tanke namazke;
• metoda 3: 0,3–0,5 ml raztopine barvila 2 in 5–6 kapljic krvi damo v epruveto s pipeto iz aparata Panchenkov. Epruveto zapremo z gumijastim zamaškom, zmes temeljito, a previdno premešamo in pustimo 1–1½ ure (retikulociti se bolje obarvajo z izpostavljenostjo 1½–3 ure). Zmešajte in pripravite tanke namazke.

4. Število retikulocitov

V razmazih so rdeče krvne celice obarvane rumenkasto-zelenkasto, zrnato-nitasta snov je modra ali modrikasto-vijolična.

• Brise, pripravljene po eni od zgornjih metod, pregledamo mikroskopsko z imerzijsko lečo;
• prešteti je treba vsaj 1000 rdečih krvnih celic in med njimi zabeležiti število rdečih krvnih celic, ki vsebujejo zrnato-nitasto snov. Za enakomerne tanke brise, v katerih so rdeče krvne celice v eni vrsti, izberite vidno polje, v katerem je na primer 50 rdečih krvnih celic, in nato izračunajte 20 takih vidnih polj;
• V praksi za večjo natančnost uporabljajo poseben okular, v katerem se vidno polje zmanjša na zahtevano velikost. Če nimate pripravljenega okularja, ga enostavno pripravite tako, da odvijete okular ×7, vanj vstavite kos papirja z izrezanim kvadratom in ga privijete. Število preštetih retikulocitov izražamo na 1000 ali na 100 rdečih krvničk.

NORMALNO: 0,5–1,2 % (30–70 × 109/l)

Povečanje števila retikulocitov opazimo pri:

• izguba krvi (zlasti akutna);
• hemolitična anemija, zlasti med krizo (do 20-30%);
• v ozadju zdravljenja megaloblastne anemije z vitaminom B12 (retikulocitna kriza - povečanje števila retikulocitov na 4.–8. dan zdravljenja).

Zmanjšanje števila retikulocitov je značilno za:

• aplastična in hipoplastična anemija;
• nezdravljena megaloblastna anemija;
• radiacijska bolezen;
• jemanje citostatikov.

Je Kristus živ? Ali je Kristus vstal od mrtvih? Raziskovalci preučujejo dejstva

dyagnoz.ru

Retikulociti normalni in štetje njihovega števila

Krvne celice, retikulociti, katerih norma se spreminja zaradi številnih dejavnikov, so neoblikovane oblike rdečih krvnih celic in jih najdemo v kostnem mozgu in periferni krvi. Praviloma retikulociti v krvi dozorijo v treh do petih dneh, nato pa se te celice spremenijo v zrele rdeče krvničke. Poleg tega je število neoblikovanih rdečih krvničk pri novorojenčkih znatno večje kot pri odraslih.

Odkrivanje retikulocitov:

Pri identifikaciji retikulocitov, katerih norma je določena s posebno tabelo, je treba upoštevati njihove razlike od zrelih rdečih krvnih celic. Ta vrsta krvnih celic bodisi vsebuje celotno jedro bodisi njegove ostanke opazimo v sestavi zrnato-nitaste snovi. Za določitev števila takšnih celic je treba v laboratoriju preučiti barvo krvnega razmaza. Za to se uporablja raztopina modrega diamanta, ki se nanese na razmaščeno in predhodno oprano steklo in šele nato se naredi razmaz.

Ko se odkrijejo retikulociti, katerih norma je drugačna, je treba takoj po razmazu uporabljeno steklo postaviti v petrijevko - posebno mokro komoro, nato jo hraniti pet minut, temeljito posušiti za svež zrak, in nato mikroskopiranje. Poleg tega je snov zrnato-filamentnega tipa znotraj retikulocita običajno pobarvana v vijolično-modri barvi, ozadje eritrocitov pa izstopa zaradi modrikasto-zelenega odtenka.

Če uporabimo metodo Gehl-Meyer, se barva nezrelih krvnih celic veliko bolje vidi, vendar je za to potrebna Widalova cev. V tej posodi se nekaj kapljic krvi zmeša z diamantno raztopino in natrijevim kloridom, nato se epruveta zapre s pokrovom in sam bris se izvede v eni uri.

Število retikulocitov:

Pri izračunu števila nezrelih krvnih celic morate za osnovo vzeti 1000 rdečih krvnih celic, nato pa upoštevati retikulocite, katerih norma se običajno giblje na ravni 0,2% -1,2% števila odraslih rdečih krvnih celic. V povprečju je pri večini ljudi število nezrelih rdečih krvnih celic običajno 0,7 % celotnega števila popolnoma zrelih krvnih celic. Če je število retikulocitov višje od meje dopustna norma za 10% ali več, oseba razvije retikulocitozo - bolezen, ki jo spremlja redna akutna krvavitev in hemolitična anemija.

Pri štetju retikulocitov (norma pri otrocih je običajno visoka) je vredno preveriti, ali njihovo število ne presega mejnih vrednosti, značilnih za odrasle. Standardi so odvisni tudi od spola, saj pri ženskah 2,07% nezrelih rdečih krvnih celic še vedno velja za sprejemljiv parameter, pri moških pa ta številka ne sme presegati 1,92%.

V primerih, ko je raven retikulocitov znatno povečana, to kaže na prisotnost motenj v telesu, kot so malarija in talasemija, policitemija in hipoksija, anemija, vse vrste hemolitičnih sindromov, vendar so takšni kazalci možni tudi med zdravljenjem s cianokobalaminom. Če je raven nezrelih rdečih krvnih celic nizka, lahko oseba doživi aplastično in hipoplastično anemijo, vse vrste bolezni ledvic in miksedem, pa tudi širjenje metastaz tumorja v kosti.

Za diagnosticiranje resnosti anemije je treba izračunati "retikulocitni indeks", ki se izračuna kot razmerje med odstotkom retikulocitov in normalnimi vrednostmi hematokrita, pomnoženo s številom dni, potrebnih za vstop nezrelih celic v periferno kri. Če dobljeni indeks ne presega dveh, indikator kaže na hipoproliferativno komponento anemije, če pa presega dva, kaže na verjetnost povečanega nastajanja rdečih krvnih celic.

fb.ru

Krvni test. Analiza krvi

Določitev koncentracije hemoglobina

Med metodami za določanje hemoglobina so najbolj razširjene metode, ki temeljijo na kolorimetriji, to je določanju intenzivnosti barve, najenostavnejša pa je določanje hemoglobina z vizualno kolorimetrijo v hemometru Sali, ki je leseno stojalo s sredinsko graduirana epruveta, ob straneh katere so zaprte steklene epruvete z barvnim standardom (klorovodikova kislina hematin v glicerinu), v osrednjo epruveto najprej vlijemo 0,1 % raztopino. klorovodikove kisline do oznake, ki ustreza 2 ali 3 g%, nato previdno dodajte (točno!) 0,02 ml krvi, odvzete iz prsta s posebno pipeto, ki je pritrjena na hemometer. Pipeto speremo s površinsko plastjo kisline in jo po mešanju krvi in ​​kisline s stekleno palčko pustimo 5 minut, da nastane hematin klorovodikove kisline. Nato z dodajanjem destilirane vode in stalnim mešanjem s paličico barva tekočine v osrednji epruveti popolnoma ustreza standardom. Koncentracija hemoglobina ustreza ravni raztopine vzdolž spodnjega meniskusa. Koncentracijo hemoglobina lahko izrazimo v g% hemoglobina ali v poljubnih enotah. Za 100 enot se vzame 16,67 g hemoglobina.

Koncentracija hemoglobina v krvi pri ženskah se giblje od 11,7 do 15,8 g / o ali od 117 do 158 g / l, pri moških - od 13,3 do 18 g% ali od 133 do 180 g / l.

Odvzem krvi za štetje oblikovanih elementov

Za štetje oblikovanih elementov se kri redči v mešalnikih (melangerjih) ali epruvetah, kar se v zadnjem času vse bolj uporablja.Za štetje rdečih krvničk se kri 200-krat razredči s 3% raztopino natrijevega klorida; če za odvzem krvi uporabljamo hemometrsko pipeto volumna 0,02 ml, potem moramo vzeti 4 ml raztopine natrijevega klorida.Za štetje levkocitov kri razredčimo 20-krat, torej 0,02 ml krvi in ​​0,38 ml 3 %. vzeta obarvana raztopina metilen modre ocetne kisline, ki je potrebna za uničenje rdečih krvničk.Odvzem krvi je treba opraviti zelo natančno, saj pri tako majhnih količinah vstop zračnega mehurčka ali ostanka krvi na zunanji strani pipete vodi do povečanja napake določanja.Pred polnjenjem komore je potrebno obrisati brušeno steklo v komori, da se pojavijo mavrični obroči.Pred polnjenjem komore razredčeno kri temeljito premešamo, saj se celice usedejo na stene epruvete ali ampule mešalnika, nato pa kapljico krvi vnesemo pod brušeno steklo komore in pustimo 1 minuto pri miru, da se celice usedejo.

Štetje oblikovanih elementov poteka pri majhni povečavi mikroskopa (8X objektiv, 15X ali 10X okular) v zatemnjenem vidnem polju.

Rdeče krvne celice se štejejo v 5 velikih kvadratih (16x5 = 80 majhnih kvadratov), ​​ki se nahajajo v različnih delih komore; lahko vzamete kvadrate, ki se nahajajo diagonalno. Predmet so rdeče krvne celice, ki ležijo znotraj kvadrata, ter tiste na zgornji in levi strani kvadrata. k štetju; rdeče krvničke, ki ležijo na dnu in desne strani, ne štejejo, saj že pripadajo drugim kvadratom.

S štetjem števila rdečih krvničk (A) v 5 velikih kvadratih najdemo aritmetično srednjo vrednost števila rdečih krvničk v enem kvadratku A/80, to je v 1/4000 µl. Da bi torej našli število rdečih krvničk v 1 μl, moramo število, dobljeno z delitvijo, pomnožiti s 4000 in z 200 (redčenje).

Tako dobimo naslednjo formulo:

X=A*4000*200/80,

kjer je X število rdečih krvnih celic v 1 μl, A je število rdečih krvnih celic v 5 velikih kvadratih.Če smo prešteli rdeče krvne celice v 5 velikih kvadratih in krv razredčili 200-krat, potem je skupni množitelj za številka A bo 10.000.

Normalna vsebnost rdečih krvnih celic v krvi žensk je 4-5 * 106, moških - 4,5-5,5 * 106.

Levkocite preštejemo v 100 velikih kvadratih, ne razdeljenih na majhne, ​​kar ustreza 1600 majhnim. Tako se število levkocitov, najdenih v 100 kvadratih, deli s 1600, pomnoži s 4000 in pomnoži z 20 (redčenje). V tem primeru je za pridobitev rezultata dovolj, da število preštetih levkocitov pomnožimo s 50. Normalna vsebnost levkocitov v krvi je 5 * 103 - 8 * 103 v 1 μl.

Barvni indeks krvi. Barvni indikator krvi je število, ki kaže povprečno nasičenost hemoglobina posamezne rdeče krvne celice dane krvi v primerjavi z nasičenostjo posamezne rdeče krvne celice normalne krvi. Normalna vsebnost hemoglobina je 100 enot in normalno število rdečih krvničk je 5 000 000. Vrednost barvni indeks zdravi ljudje se giblje od 0,9 do 1,1 Študija razmaza periferne krvi. V krvnih brisih preučujemo morfologijo rdečih krvničk in izračunamo levkocitno formulo, to je odstotno razmerje med različnimi vrstami levkocitov.Da bi bila študija uspešna, je treba opraviti pripravo, fiksacijo in barvanje krvnih brisov. Za pripravo brisa uporabite čisto, nemastno stekleno površino na razdalji 0,5 cm od roba predmetnega stekelca, dotaknite se kapljice krvi na mestu vboda na prstu in nato položite tla. pokrovno steklo pod kotom 45° glede na objektno stekelce in prvega približajte kapljici krvi, tako da se razlije po zadnjem robu pokrovnega stekelca in s pljučnim gibom brez ostrega pritiska naredite razmaz. Bris se mora na stekelcu končati kot "metla". Bris sušimo na zraku, ko se posuši, je dober, tanek bris rumene barve.

S preprostim, ostrim svinčnikom se na sredini brisa napiše ime pacienta in datum študije, nato pa se brisi vsaj 5 minut fiksirajo v metilnem alkoholu in obarvajo z metodo Romanovsky-Giemsa.

Barva je sestavljena iz mešanice kislih (eozin) in bazičnih (Azur II) barvil. Ta metoda obarvanja omogoča razlikovanje celic. Prva faza dela z brisom je ocena morfologije rdečih krvnih celic. Če želite to narediti, izberite tanko mesto, kjer celice ležijo ločeno in ne v obliki stolpcev kovancev. Normalne rdeče krvne celice so brezjedrne, obarvane roza barva celice so okrogle, približno enakega premera - 7,5 mikronov, rdeče krvne celice imajo obliko bikonkavnega diska, zato imajo v razmazu čistino v sredini in intenzivneje obarvano periferijo.

(modul direct4)

Priprava goste kapljice

Za testiranje krvi na Plasmodium malarijo se naredi debela kapljica. Kri se odvzame na običajen način iz mesa prsta. Kapljico krvi, ki štrli iz mesta injiciranja, se dotaknemo s površino predmetnega stekla. 2-3 kapljice, ki jih nanesemo ločeno, namažemo z vogalom drugega kozarca. Suh razmaz prelijemo (brez fiksacije) z barvo Romanovsky 30-40 minut, nato naslikano kapljico previdno speremo z vodo in pripravek posušimo v navpičnem položaju.

Podatki analize vzorcev

Povečano število eritrocitov in hemoglobina v krvi se lahko pojavi pri bolezni rdečih elementov krvi - eritremija, takrat število eritrocitov doseže 9-106 ali več.Povišana vsebnost eritrocitov v krvi se lahko pojavi sekundarno, tj. je, ko ni bolezni rdečega lista hematopoeze in se število rdečih krvnih celic poveča zaradi bolezni drugih organov in sistemov (z dekompenzirano difuzno pnevmosklerozo, pljučnim emfizemom, nekaterimi vrstami prirojene okvare srce, vaskularna skleroza sistema pljučne arterije, okvare desnega srca, cirkulatorna odpoved tretje stopnje itd.). Ta simptom se imenuje eritrocitoza.

Morfološko spremenjene rdeče krvničke se pojavijo pri hiperkromni (megaloblastni) anemiji. V tem primeru se v krvi nahajajo velike rdeče krvne celice z visoko vsebnostjo hemoglobina (makrociti), embrionalne rdeče krvne celice (megaloblasti), ki jih običajno ni v periferni krvi. Pri hipokromni anemiji se spremeni tudi morfologija eritrocitov: pojavijo se majhni eritrociti (mikrociti) spremenjene oblike (poikilociti) in eritrociti z nizko vsebnostjo hemoglobina (hipokromni eritrociti).

Število levkocitov

Pri izračunu formule levkocitov je treba določiti strukturne značilnosti citoplazme in jedra celic. Pripadnost celice eni ali drugi skupini se določi na podlagi celotnega števila značilnosti citoplazme in jedra.Pri izračunu formule se je treba držati iste metode premikanja stekla pod mikroskopom. Najpogosteje uporabljena metoda je mikroskopiranje 4 mest brisa. Znano je, da so levkociti v razmazu razporejeni neenakomerno: na robovih je manj limfocitov kot v sredini, na koncu razmaza pa je več monocitov kot na začetku. Zato je pri izračunu levkocitne formule najbolje, da se premikate vzdolž lomljene črte in štejete vse celice, ki jih srečate.Štetje 200 celic je praktični minimum za rutinske klinične študije.levkociti periferne krvi, odvisno od prisotnosti ali odsotnosti zrnatosti v citoplazmo, delimo na granulocite (nevtrofilce, eozinofilce, bazofilce) in agranulocite (monocite in limfocite).

Nevtrofilci. Velikost celice je 10-12 mikronov. Citoplazma celic je bledo rožnata z majhnimi, obilnimi, vijolična zrnatost. Običajno so v krvi trakasti (2-4%) in segmentirani (60-65%) nevtrofilci.

Eozinofili. Celice so enake velikosti kot nevtrofilci, včasih nekoliko večje, citoplazma je napolnjena z velikimi rumenkasto rdečimi zrnci, jedro ima običajno dva enako velika segmenta. Eozinofilcev je običajno 2-4 %, bazofilcev. To je najmanjši granulocit po velikosti. Jedro je nepravilno, večdelno, zavzema skoraj celotno celico, bledo rožnata citoplazma vsebuje velika temno vijolična zrnca. Bazofilna zrnca se raztopijo v vodi, včasih pa zaradi izpiranja pri barvanju pripravka namesto zrnc ostanejo brezbarvne celice. Normalni bazofilci so 0,1 % Limfociti. Velikost celice je od 7 do 10 mikronov. Jedro je kompaktne strukture, okrogle ali fižolaste oblike. Citoplazma celic je bledo modra s čistilno cono okoli jedra (perinuklearno), včasih v citoplazmi najdemo posamezna azurofilna zrna rdeče-vijolične barve. V periferni krvi je običajno 20-35% limfocitov Monociti. Velikost celic je od 12 do 20 mikronov. Jedro je pogosto v obliki podkve, včasih nepravilne oblike. Citoplazma je obsežnejša od limfocitov, pepelnato modre barve s fino, občutljivo, rdečkasto zrnatostjo.Monocitov je običajno 6-8%.

Povečano raven levkocitov v krvi imenujemo levkocitoza, znižano raven pa levkopenija.

Barvanje in štetje retikulocitov

Retikulociti so mlade rdeče krvne celice s tanko modro mrežnico ali zrnatostjo v citoplazmi. Te celice označujejo aktivnost rdeče hematopoeze.Za določitev števila retikulocitov se uporablja metoda supravitalnega (intravitalnega) barvanja. Na objektnih stekelcih v absolutnem alkoholu naredimo razmaze briljantne krezil modre barve, nato pa na pobarvano steklo na običajen način naredimo razmaz krvi in ​​ga postavimo v vlažno komoro za 3-5 minut, nato ga posušimo in mikroskopirano z imerzijsko lečo. Običajno je 8-10 retikulocitov na 1000 rdečih krvnih celic, njihovo število je običajno izraženo v odstotkih (0,8-1%) ali v ppm (8-10% o) glede na rdeče krvne celice.Retikulociti so celice, ki karakterizirajo povečano nastajanje rdečih krvničk v kostnem mozgu.

V velikem odstotku se pojavijo v periferni krvi med hipokromno anemijo (“ perniciozna anemija"), s hemolitično anemijo in drugimi boleznimi. Med poslabšanjem hiperkromne anemije opazimo zmanjšanje vsebnosti retikulocitov in njihovo popolno izginotje v periferni krvi.

Za preprečevanje združevanja (lepljenje) krvnih ploščic Kožo prebodemo s kapljico 14% raztopine magnezijevega sulfata, ki se nanese na prst. Kri zmešamo z magnezijem in pripravimo tanke razmaze na stekelcih, ki jih nato fiksiramo in 2 uri obarvamo po Romanovskem.Določimo število trombocitov na 1000 rdečih krvničk in ob poznavanju števila rdečih krvničk v. 1 μl se izračuna število trombocitov v 1 μl krvi. Normalno število trombocitov se giblje od 250.000 do 400.000.

Določitev ESR

Hitrost sedimentacije eritrocitov določimo v krvi, zmešani z natrijevim citratom v razmerju 4: 1. Reakcija poteka v aparatu Panchenkov. Panchenkovo ​​kapilaro speremo z natrijevim citratom, nato citrat dopolnimo do oznake 50, kjer je zapisana črka P (reagent), in ga vpihnemo v epruveto Vidalev. Z isto kapilaro dvakrat vzamemo kri do oznake K (kri) in jo zmešamo s citratom. Isto kapilaro napolnimo s krvjo, pomešano s citratom do delitve 0, in postavimo navpično v stativ za eno uro. Po eni uri se v milimetrih zabeleži velikost plazemskega stolpca, ki nastane nad usedlimi eritrociti, kar je merilo za hitrost sedimentacije eritrocitov. normalen ESR pri moških je 10 mm/h, pri ženskah pa 14 mm/h.

Hitrost sedimentacije eritrocitov se poveča pri vnetnih, akutnih in kroničnih boleznih, s maligni tumorji in druge bolezni.

Test združljivosti Rh faktorja

V epruveto brez citrata odvzamemo 2-3 ml krvi prejemnika, po strjevanju krvi strdek obkrožimo s stekleno paličico in kri centrifugiramo. Dve kapljici seruma iz te epruvete nanesemo na petrijevko, ji dodamo pol kapljice krvi darovalca, premešamo in posodo postavimo v vodno kopel (42-45°). Po 10 minutah skodelico odstranimo in z nežnim zibanjem pregledamo na svetlobi. Pojav aglutinacije bo pokazal nesprejemljivost transfuzije te krvi.

Lastniki patenta RU 2612018:

Izum se nanaša na medicino, in sicer na laboratorijska diagnostika, in se lahko uporablja za samodejno štetje retikulocitov na analizatorjih krvnih razmazov. Bistvo izuma: po začetnem supravitalnem obarvanju retikulocitov z briljantno krezil modro brise dodatno fiksiramo in 1 minuto obarvamo s fiksativom po May-Grunwaldu, speremo s tekočo vodo, posušimo in preštejemo retikulocite na avtomatskem analizatorju krvnih razmazov. Tehnični rezultat: povečana natančnost in pospešek štetja retikulocitov. 2 ilustr., 3 ave.

Izum se nanaša na medicino, in sicer na laboratorijsko diagnostiko, in se lahko uporablja za samodejno štetje števila retikulocitov na analizatorjih krvnih razmazov.

Količina in visokokakovostna sestava retikulociti so eden od pomembnih kazalcev, ki označujejo učinkovitost hematopoeze, njihovo štetje pa se pogosto uporablja pri izvajanju mase preventivni pregledi in je urejeno s številnimi ukazi. Uporaba avtomatskih analizatorjev krvnega razmaza omogoča avtomatsko oceno celična sestava krvni razmaz obarvan po Romanovsky-Giemsi. Vendar pa je štetje retikulocitov v takšnih brisih nemogoče, ker retikulofilamentna snov ni zaznana pri barvanju po Romanovsky-Giemsi.

Znana je metoda za štetje števila retikulocitov po supravitalnem barvanju v posebej pripravljenem krvnem razmazu. Laboratorijske metode klinične raziskave: priročnik / Menshikov V.V., Delktorskaya L.N., Zolotnitskaya R.P. in itd.; Ed. V.V. Menšikov. - M.: Medicina, 1987, - 368 str.: ilustr., str. 118-119]. Da bi to naredili, kri, zbrano z antikoagulantom (etilendiamid tetraacetat, heparin ali natrijev citrat), zmešamo z raztopino briljantnega krezil modrega barvila (diamantno krezil modro), zmes inkubiramo 30 minut in pripravimo tanek razmaz. Vendar pa pri uporabi avtomatskih analizatorjev krvnega razmaza ta metoda obarvanja retikulocitov daje netočne rezultate števila retikulocitov. To je posledica dejstva, da so pri tej metodi barvanja rdeče krvne celice obarvane bledo, v različnih odtenkih rumeno-modre, kar otežuje samodejno prepoznavanje celic in identifikacijo retikulofilamentne snovi, ki se obarva tudi modro-zeleno (sl. 1).

Tehnični rezultat: povečana natančnost in pospešek štetja retikulocitov.

Ta rezultat dosežemo s spremembo protokola barvanja in uporabo avtomatskih analizatorjev krvnega razmaza.

Metoda je pojasnjena na fotografijah, kjer je na prvi fotografiji (slika 1) rezultat tradicionalnega barvanja retikulocitov (prototip); eritrociti so pobarvani v različnih odtenkih zelenkasto-modre barve, v dveh od njih je opazna modra retikulo-filimentarna snov retikulocitov. Druga fotografija prikazuje rezultat uporabe predlagane metode za pripravo krvnega razmaza: rdeče krvne celice so pobarvane svetlo rdeče, na ozadju katerih je retikulo-filamentna snov retikulocitov pobarvana svetlo modro (slika 2).

Metoda se izvaja na naslednji način.

Preiskovancu se na primer odvzame kri z antikoagulantom kalijeva sol etilendiamintetraocetna kislina. Supravitalno obarvanje retikulocitov izvajamo z briljantno krezilno modro (diamantno krezilno modro). Dodajte 0,4 ml raztopine barvila v 0,1 ml polne krvi in ​​inkubirajte 30 minut. Nato iz nastale mešanice pripravimo tanek namaz. Po sušenju nanosa dodatno fiksiramo in pobarvamo s fiksirno barvo May-Grunwald. Da bi to naredili, se posušen razmaz za 1 minuto postavi v posodo s fiksirno barvo, nato se odstrani iz posode in spere s tekočo vodo. Po sušenju se zdravilo pregleda na analizatorjih krvnega razmaza, na primer Vision Hema ® (FIRM MEDICA PRODUCT, Rusija). Eritrociti so obarvani rdeče, proti temu pa je v retikulocitih jasno vidna modra retikulofilamentna snov (slika 2). Zberemo in analiziramo rdeče krvničke, vsaj 1000 kosov. Število rdečih krvnih celic, ki vsebujejo retikulofilamentno snov, se šteje glede na vse zbrane rdeče krvne celice. Rezultat je izražen v odstotkih.

Za barvanje krvnih razmazov se uporabljajo naslednje raztopine:

1) raztopina briljantnega krezil modrega v absolutnem alkoholu. Za pripravo absolutnega alkohola je potrebno namočiti 96% etanol v več menjavah žganega bakrovega sulfata (dokler prašek brezvodnega bakrovega sulfata ne preneha modriti). Za 100 ml absolutnega alkohola vzemite 1,2 g barve (Medicinske laboratorijske tehnologije in diagnostika: Imenik. Medicinske laboratorijske tehnologije / Uredil prof. A.I. Karpishchenko. - Sankt Peterburg; Intermedica, 2002. - 408 str. P.284 ).

2) Fiksna barva May-Grunwald - 1 g suhe barve je treba raztopiti v 1 litru metilnega alkohola. (Medicinske laboratorijske tehnologije in diagnostika: Imenik. Medicinske laboratorijske tehnologije / Uredil prof. A.I. Karpishchenko. - Sankt Peterburg; Intermedica, 2002. - 408 str. str. 277).

Primeri konkretne izvedbe:

Primer 1. Bolnik I., 48 let. Bil je podvržen občasnim pregledom, kot delavec v rafineriji nafte. Bolniku smo odvzeli kri z antikoagulantom (kalijeva sol etilendiaminoocetne kisline) in pripravili 2 razmaza. Retikulocite v enem razmazu smo obarvali tradicionalna metoda, samo z briljantno kresil modro. Retikulocite v drugem brisu smo obarvali po predlagani metodi. Da bi to naredili, smo 0,1 ml krvi zmešali z raztopino briljantnega krezil modrega in inkubirali 30 minut. Nato je bil odvzet tanek krvni razmaz. Po sušenju smo krvni razmaz dodatno fiksirali in obarvali tako, da smo ga potopili v fiksirno barvo May-Grunwald. Število retikulocitov v brisih smo določali z analizatorjem krvnih razmazov Vision Hema ® Pro (FIRM MEDICA PRODUCT, Rusija) in ročno pod svetlobnim mikroskopom (Meiji, Japonska).

Število retikulocitov, preštetih na analizatorju krvnega razmaza s tradicionalnim barvanjem, je bilo 1,5%, kar je preseglo referenčno normalno območje, v razmazu, obarvanem s predlagano metodo, pa 0,9%, kar ustreza normalnim vrednostim za odraslega. Pri ročnem štetju retikulocitov je bilo njihovo število v istih brisih 0,8 % oziroma 0,9 %. To kaže na povečanje natančnosti štetja analizatorjev krvnih razmazov pri uporabi predlagane metode priprave razmazov. Hkrati je bila hitrost preučevanja retikulocitov na analizatorju krvnega razmaza 48 in 54 sekund, medtem ko je ročno štetje retikulocitov trajalo 270 in 238 sekund.

Tako ta primer dokazuje, da predlagano obarvanje retikulocitov pri uporabi analizatorjev krvnih razmazov vodi do večje natančnosti rezultatov in hitrejšega števila retikulocitov.

Primer 2. Bolnik Z. je bil hospitaliziran na hematološkem oddelku KMSCH 1 v Permu z diagnozo aplastične anemije. V okviru protokola pregleda je bilo opravljeno štetje retikulocitov. Bolniku smo odvzeli kri z antikoagulantom (kalijeva sol etilendiaminoocetne kisline) in pripravili 2 brisa. Retikulocite v enem razmazu smo obarvali po tradicionalni metodi, le z briljantno krezilno modro. Retikulocite v drugem brisu smo obarvali po predlagani metodi. Da bi to naredili, smo 0,1 ml krvi zmešali z raztopino briljantnega krezil modrega in inkubirali 30 minut. Nato je bil odvzet tanek krvni razmaz. Po sušenju smo krvni razmaz dodatno fiksirali in obarvali tako, da smo ga potopili v fiksirno barvo May-Grunwald. Število retikulocitov v brisih smo določali z analizatorjem krvnih razmazov Vision Hema ® Pro (FIRM MEDICA PRODUCT, Rusija) in ročno pod svetlobnim mikroskopom (Meiji, Japonska).

Število retikulocitov, preštetih na analizatorju krvnega razmaza v brisu, obarvanem tradicionalno, je bilo 0,3%, v brisu, obarvanem po modificirani metodi, - 0,2%. Pri ročnem štetju je rezultat 0,2% in 0,2%. Pri tem je bila hitrost štetja retikulocitov na analizatorju krvnega razmaza 58 in 52 sekund, ročno štetje retikulocitov pa 302 oziroma 338 sekund.

V tem primeru zaradi nizke vsebnosti retikulocitov ni bilo ugotovljenih bistvenih razlik v rezultatih, vendar je treba opozoriti na nekoliko napihnjen rezultat, ki ga dobimo na analizatorju krvnega razmaza pri pregledu brisa, obarvanega na običajen način. Tako kot v prejšnjem primeru je bilo dokazano pomembno (skoraj 5-kratno pospeševanje štetja retikulocitov).

Primer 3. Pacient K. Hospitaliziran na oddelku za neonatalno patologijo Otroške mestne klinične bolnišnice št. 13 v Permu z diagnozo hemolitične bolezni novorojenčkov. V okviru protokola pregleda je bilo opravljeno štetje OAK s štetjem retikulocitov. Bolniku smo odvzeli kri z antikoagulantom (kalijeva sol etilendiaminoocetne kisline) in pripravili 2 brisa. Retikulocite v enem razmazu smo obarvali po tradicionalni metodi, le z briljantno krezilno modro. Retikulocite v drugem brisu smo obarvali s predlagano metodo. Da bi to naredili, smo 0,1 ml krvi zmešali z briljantno krezilno modro raztopino in inkubirali 30 minut. Nato je bil odvzet tanek krvni razmaz. Po sušenju smo krvni razmaz dodatno fiksirali in obarvali tako, da smo ga potopili v fiksirno barvo May-Grunwald. Število retikulocitov v brisih smo določali z analizatorjem krvnih razmazov Vision Hema ® Pro (FIRM MEDICA PRODUCT, Rusija) in ročno pod svetlobnim mikroskopom (Meiji, Japonska).

Število retikulocitov, preštetih na analizatorju krvnega razmaza v brisu, obarvanem tradicionalno, je bilo 30,3%, v brisu, obarvanem po modificirani metodi, 21,2%. Pri ročnem štetju je rezultat 20,6 % in 22,4 %. Hkrati je bila hitrost štetja retikulocitov na analizatorju krvnega razmaza 52 in 51 sekund, medtem ko je ročno štetje retikulocitov trajalo 298 in 304 sekunde.

Ta primer kaže zmanjšanje natančnosti štetja retikulocitov na analizatorjih krvnih razmazov v steklenih stekelcih, obarvanih s tradicionalno metodo, zlasti kadar visoka vsebnost retikulociti. Uporaba nove metode obarvanja brisov je privedla do skoraj popolnega sovpadanja rezultatov štetja retikulocitov na avtomatskem analizatorju in ročno, medtem ko se je hitrost štetja retikulocitov povečala za več kot 5-krat.

1. Metoda priprave krvnih razmazov za štetje retikulocitov s supravitalnim barvanjem retikulocitov z briljantnim krezil modrim, označena s tem, da po barvanju z briljantnim krezil modrim brise dodatno fiksiramo in obarvamo s fiksativom po May-Grunwaldu 1 minuto, speremo s tekočo vodo, posušimo in retikulocite preštejemo na avtomatskem analizatorju krvnega razmaza.

Podobni patenti:

Izum se nanaša na diagnostiko, in sicer na metodo za napovedovanje razvoja gnojnih zapletov pankreasne nekroze. Metoda za napovedovanje razvoja gnojnih zapletov nekroze trebušne slinavke je, da se pri bolniku s sterilno nekrozo trebušne slinavke od petega dne od začetka bolezni zmanjša aktivnost alfa-amilaze v krvi, vsebnost v krvi skupne beljakovine, limfociti, monociti, razmerje med albuminom in globulinom v krvnem serumu, resnost bolnikovega stanja po naslednjih lestvicah SAPS, SOFA, SIRS, prisotnost parapankreatičnega infiltrata, pareza gastrointestinalnega trakta, akutno kopičenje tekočine v omentalno burzo ali retroperitonealno tkivo in izračunajte indeks okužbe pankreasne nekroze (IIPN) po formuli.

Skupina izumov se nanaša na določanje koncentracije analita v biološka tekočina na podlagi dobljenih odvisnosti trenutne vrednosti od časa. Metoda za določanje koncentracije analita v fiziološki tekočini vključuje namestitev reagenta za interakcijo z analitom v fiziološki tekočini med prvo elektrodo in drugo elektrodo, nanašanje fiziološke tekočine na reagent, transformacijo analita v fiziološko tekočino in vzbujanje nestacionarnega toka iz vsake od prve in druge elektrode, določanje vrha nestacionarnega toka za vsako od prve in druge elektrode, merjenje vrednosti prehodnega toka pri danem časovnem odmiku od vrha vsakega prehodnega toka od vsake od prve in druge elektrode, pri čemer časovni zamik za prvo elektrodo obsega prvi časovni zamik od vrha prehodnega toka prve elektrode in časovni zamik od vrha prehodnega toka druge elektrode obsega drugi časovni zamik drugačen od prvega časovnega odmika, in izračun koncentracije analita na podlagi izmerjenih trenutnih vrednosti prve in druge elektrode v merilnem koraku.

Izum se nanaša na medicino in je metoda za določanje sindroma bolečine zaradi polinevropatije pri bolnikih z vibracijsko boleznijo, vključno z zbiranjem venske krvi, pridobivanjem krvnega seruma in določanjem kvantitativne vsebnosti serotonina v njem.

Izum se nanaša na medicino, in sicer na pulmologijo, in zadeva metodo za izbiro trajanja zdravljenja s ceruloplazminom pri bolnikih z bronhialna astma. Bistvo metode je, da pri bolnikih z bronhialno astmo določimo v krvi superoksid dismutazo (SOD) in malonaldehid (MA) ter njuno razmerje MDA/SOD po zdravljenju s ceruloplazminom v odmerku 100 mg intravensko enkrat na dan 7 dni. dnevi.

Izum se nanaša na ihtiologijo in ribogojstvo in je metoda testiranja fiziološko stanje jesetra, vključno s študijo ribjega krvnega seruma, označena s tem, da se krvni serum pregleda z metodo mejne dehidracije v analitičnih celicah in proizvede morfološka analiza oblikovane strukture v načinu konvencionalne mikroskopije pri različnih povečavah, medtem ko so dendritične in prehodne oblike pokazatelji norme homeostaze, prisotnost lamelarnih struktur pa kaže na spremembe, ki se pojavljajo v telesu rib.

Izum se nanaša na medicino, in sicer na presaditev organov in klinično laboratorijsko diagnostiko. 3-4 tedne po presaditvi jeter otrokom v krvni plazmi izmerimo koncentracijo transformirajočega rastnega faktorja beta 1 (TGF-β1) v ng/ml.

Izum se nanaša na področje medicine in se nanaša na metodo za ugotavljanje resnosti napada pri bolnikih s Crohnovo boleznijo. Bistvo metode je, da hitrost sedimentacije eritrocitov (ESR), koncentracija C-reaktivni protein(CRP), raven vaskuloendotelnega faktorja (VEF) v serumu, izračunamo število deskvamiranih endotelijskih celic (DEC) v krvni plazmi in ocenimo koncentracijo mikroalbumina (MAU) v urinu.

Izum se nanaša na zaporne ventile, ki se uporabljajo za plinaste medije, in se lahko uporabljajo zlasti v posodah za vzorčenje. Plinotesen ventil vsebuje osnovo 1, telo 2, vsaj štiri tesnilne obroče 5, 6, 7 in 8 iz elastičnega polimernega materiala in vreteno 3 s tuljavo 3a.

Retikulociti so mlade rdeče krvne celice, ki nastanejo po tem, ko normoblasti izgubijo svoje jedro.

Značilna lastnost retikulocitov je prisotnost zrnate mrežaste snovi, ki se pojavi s supravitalnim obarvanjem, to je brez predhodne fiksacije celic.

Elektronsko mikroskopsko prikazano da zrnato-retikularne strukture predstavljajo ostanke endoplazmatskega retikuluma, ribosomov in mitohondrijev, ki vsebujejo RNA. V retikulocitih se v majhni meri sintetizirajo beljakovine (globin), hem, purini, pirimidinski nukleotidi, fosfatidi in lipidi, vendar se v njih ne sintetizira RNA. 2 dni ostane retikulocit v krvnem obtoku, nato pa, ko se RNA zmanjša, postane zrel eritrocit.

V brisih, obarvanih s konvencionalnimi hematološkimi metodami, so retikulociti sivkasto rožnate barve – polikromatofilni, tj. pobarvan z različnimi barvami.

Metode štetja retikulocitov

Trenutno se uporablja enotna metoda za štetje števila retikulocitov po njihovem obarvanju

• briljantno krezilno modra,
• Azure I oz
• Azure II neposredno na steklu ali v epruveti.

1. Načelo metode

Odkrivanje granularno-retikularne snovi eritrocitov pri barvanju z alkalnimi barvami z njihovim nadaljnjim štetjem v krvnem razmazu.

2. Reagenti:

a) nasičena raztopina briljantnega krezil modrega v absolutnem alkoholu(za pripravo absolutnega alkohola morate 96% etanol namočiti v več spremembah kalciniranega bakrovega sulfata v prahu): 1,2 g barve na 100 ml alkohola;

b) raztopina azur I: azur I - 1 g, amonijev oksalat - 0,4 g, natrijev klorid - 0,8 g, 96% etilni alkohol - 10 ml, destilirana voda - 90 ml. Raztopino barve v zaprti steklenici postavimo v termostat pri 37 °C za 2–3 dni in občasno močno pretresemo. Nato ohladimo na sobno temperaturo in filtriramo skozi papirnati filter. Raztopina je shranjena v temni stekleni posodi. Če se pojavi usedlina, je treba barvo ponovno filtrirati;

c) Raztopina Azur II: azur II - 1 g, natrijev citrat - 5 g, natrijev klorid - 0,4 g, destilirana voda - 45 ml. Raztopino pustimo v termostatu pri 37 °C 2 dni, občasno premešamo. Da bi pospešili raztapljanje, lahko barvo segrevamo na majhnem ognju 15–20 minut, ne da bi zavreli. Ohladimo na sobno temperaturo in filtriramo. Shranjujte v temnih steklenih posodah.

3. Barvanje

Barvanje na steklu:

• dobro oprano in razmaščeno stekelce segrejemo nad plamenom gorilnika. S stekleno paličico nanesemo kapljico enega od barvil na steklo in z brušenim steklom pripravimo madež barve. S steklografom označite stran stekla, na katero je nanešena poteza barve. V tej obliki lahko steklo pripravimo za prihodnjo uporabo in ga shranimo v suhem in temnem prostoru;
• Na tako pripravljeno steklo nanesemo kapljico krvi, naredimo tanek razmaz in steklo takoj postavimo v vlažno komoro. Za to uporabite petrijevko s pokrovom, v katero po robovih položite rahlo navlažene zvitke gaze ali vate;
• Brise hranimo v vlažni komori 3–5 minut in nato posušimo na zraku. Zrnata mrežasta snov retikulocitov je pobarvana vijolično modro in jasno izstopa na zelenkasto modrikastem ozadju eritrocitov.

In vitro barvanje:

• metoda 1: Pred uporabo v epruveti pripravimo delovno raztopino briljantnega krezil modrega iz kapljice 1% raztopine kalijevega oksalata in 4 kapljic raztopine barve 1. Barvi dodamo 40 μl krvi (dve pipeti do oznake 0,02). Mešanico temeljito, a nežno premešamo in pustimo 30 minut. Mešajte in pripravite tanke namazke;
• metoda 2: V epruveto damo 0,05 ml raztopine barvila 3 in 0,2 ml krvi. Zmes temeljito premešamo in pustimo 20-30 minut. Mešajte in pripravite tanke namazke;
• metoda 3: 0,3–0,5 ml raztopine barve 2 in 5–6 kapljic krvi damo v epruveto s pipeto iz aparata Panchenkov. Epruveto zapremo z gumijastim zamaškom, zmes temeljito, a previdno premešamo in pustimo 1–1½ ure (retikulociti se bolje obarvajo z izpostavljenostjo 1½–3 ure). Zmešajte in pripravite tanke namazke.

4. Število retikulocitov

V razmazih so rdeče krvne celice obarvane rumenkasto-zelenkasto, zrnato-nitasta snov je modra ali modrikasto-vijolična.

• Brise, pripravljene po eni od zgornjih metod, pregledamo mikroskopsko z imerzijsko lečo;
• prešteti je treba vsaj 1000 rdečih krvnih celic in med njimi zabeležiti število rdečih krvnih celic, ki vsebujejo zrnato-nitasto snov. Za enakomerne tanke brise, v katerih so rdeče krvne celice v eni vrsti, izberite vidno polje, v katerem je na primer 50 rdečih krvnih celic, in nato izračunajte 20 takih vidnih polj;
• V praksi za večjo natančnost uporabljajo poseben okular, v katerem se vidno polje zmanjša na zahtevano velikost. Če nimate pripravljenega okularja, ga enostavno pripravite tako, da odvijete okular ×7, vanj vstavite kos papirja z izrezanim kvadratom in ga privijete. Število preštetih retikulocitov izražamo na 1000 ali na 100 rdečih krvničk.

Kvantitativna vsebnost retikulocitov

NORMALNO: 0,5–1,2 % (30–70 × 10 9 /l)

Povečanje števila retikulocitov opazimo pri:

• izguba krvi (zlasti akutna);
• hemolitična anemija, zlasti med krizo (do 20-30%);
• v ozadju zdravljenja megaloblastne anemije z vitaminom B12 (retikulocitna kriza - povečanje števila retikulocitov na 4.–8. dan zdravljenja).

Zmanjšanje števila retikulocitov je značilno za:

• aplastična in hipoplastična anemija;
• nezdravljena megaloblastna anemija;
• radiacijska bolezen;
• jemanje citostatikov.