Иммуноферментный анализ крови с расшифровкой показателей. Анализ ИФА: расшифровка Иммуноферментный анализ сыворотки

Развитие современной медицины в мире диагностики не перестает удивлять своими достижениями, и теперь врачу нет необходимости высказывать предположения о вероятном диагнозе, опираясь лишь на косвенные признаки. Создание и введение в мир лабораторных исследований иммуноферментного анализа крови (ИФА) позволяет быстро и точно определить не только наличие возбудителя, но и многие другие характеристики заболевания.

История создания и развития ИФА

Данный метод исследования крови стал применяться в практической медицине еще в середине прошлого столетия – где-то в 60-х годах. Изначальной его целью были научные исследования в области гистологии, которые ограничивались поиском и изучением клеточной антигенной структуры биологических видов. Анализ крови методом ИФА основан на взаимодействии родственных антигенов (АГ) и специфических антител (АТ), с формированием комплекса «антиген-антитело», определяемого ферментом.

Такой феномен подтолкнул ученых к решению, что способ можно применять для распознавания белковых соединений различных классов, образующихся в сыворотке крови при попадании в организм возбудителя. Из-за своей непосредственной вовлеченности в функционирование иммунной системы эти соединения получили название иммуноглобулины (ИГ, Ig), а открытие стало величайшим прорывом в лабораторной диагностике.

При этом активно использовать этот высокочувствительный метод стали лишь в 80-х годах, и доступен он был только в узкоспециализированных медицинских учреждениях. Самыми первыми получили возможность пользоваться иммуноферментными анализаторами станции и центры переливания крови, венерологические и инфекционные лечебные заведения. Это было связано со стремительным распространением «чумы XX века» – СПИДа, и требовалось срочное принятие диагностических и терапевтических мер.

Возможности методики

Область применения анализа крови на ИФА довольно широка – на данный момент невозможно и представить, насколько бы усложнились поиски причины множества заболеваний. Такое исследование теперь применяется практически во всех медицинских отраслях, даже в онкологии. Хоть для неосведомленных это сложно понять, но в отдельных случаях проведя его, удалось спасти жизнь пациентам, обнаружив опухоль на ранних стадиях.

Важно! ИФА – анализ крови, который показывает маркеры, характерные для некоторых злокачественных процессов, что позволяет обнаружить заболевание на том временном этапе, когда никакому другому способу это неподвластно.

В современных диагностических центрах, лабораторные обследования представлены не только онкомаркерами – они снабжены внушительным арсеналом панелей для проведения данной диагностики. С их помощью можно определить множество патологических состояний, таких как гормональные отклонения и инфекционные процессы различного происхождения.

Кроме этого, проведение и расшифровка анализа крови ИФА даст возможность отследить действие медицинских препаратов на организм больного человека и даже животного. Последнее широко применяется в ветеринарных клиниках, помогая сохранить здоровье нашим домашним питомцам либо кормильцам, обеспечивающим стабильное поступление мясной, молочной продукции и незаменимых в рационе яиц.

Так, в результате забора всего нескольких миллилитров венозной крови и ее диагностики методикой ИФА, врач, описав материалы исследования, сможет определить:

• гормональное состояние, включающее биологически активные вещества половых и щитовидной желез, а также надпочечников;
• наличие бактериальной и вирусной инфекции (гепатит В и С, сифилис, герпес, хламидиоз, туберкулез, мико- и уреаплазмоз, ВИЧ, TORCH) и другие заболевания данной природы;
• признаки жизнедеятельности возбудителей патологического процесса, завершившегося выздоровлением и перешедшего в стадию образования антител (иммунного ответа).

Такие комплексы гораздо проще распознаются и ликвидируются клетками иммунитета. Остаточные явления в виде антител во множественных случаях содержатся в крови пожизненно, что практически сводит риски повторного заражения к нулю.

Разновидности иммуноглобулинов

Существует несколько видов антител, причем каждый из них вовлекается в процесс иммунного ответа на определенном этапе. К примеру, первыми в ответ на попадание АГ в организм образовываются иммуноглобулины класса М (IgM). Самые высокие их показатели наблюдаются в первые дни заболевания.

Виды используемых при ИФА иммуноглобулинов

Затем иммунная система запускает в плазму ИГ класса G (IgG), ответственные за полное уничтожение антигенов и выздоровление больного. Позже они так и продолжают находиться в крови, тем самым подготавливая иммунитет к повторному попаданию идентичного возбудителя. По такому принципу работает вакцинация. При введении ослабленных антигенов патологических микроорганизмов, в плазме появляется и остается циркулировать много иммуноглобулинов.

Основными интересующими объектами для лабораторной диагностики считаются Ig классов M, G и A. По уровню их концентрации можно определить стадию заболевания и узнать, какими инфекционными болезнями человек болел в своей жизни. Например, можно проверить была ли в анамнезе ветряная оспа или краснуха. Врачу, чтобы узнать присутствует ли определенный вид АТ или АГ в организме пациента или концентрацию какого-либо гормона, нет необходимости назначать множественные лабораторные обследования – достаточно выписать направление на ИФА.

Суть методики

Методика исследования строится на нескольких вариантах (прямой и непрямой – конкурентный и неконкурентный) выполнения поставленных задач, причем каждый из них предназначен для определенных целей. Такой подход позволяет производить целенаправленный поиск, и в кратчайшие сроки выявлять причину той или иной патологии. Для обнаружения Ig разных классовых категорий применяется 96-луночный планшет (полистироловая панель), а в его лунках расположены сорбированные рекомбинантные белки. Они исполняют роль антигенов, и на начальном этапе находятся в твердой фазе.

При попадании в лунку с плазмой крови, антигены или антитела идентифицируют в связи со своей направленностью объект, и формируют комплекс (АГ – АТ). Данное образование закрепляется ферментным соединением (коньюгатом), который впоследствии проявится измененным окрашиванием лунки. ИФА производится на специфических тест-системах, изготовленных в профильных лабораториях и укомплектованных полным набором реагентов.

Данный анализ можно выполнять на вошерах – промывных аппаратах и считывающих спектрофометров, но они требуют ручного труда. Безусловно, лаборанту в несколько раз удобнее и быстрее осуществлять все манипуляции на полностью автоматизированных приборах. При их использовании сотрудники лаборатории освобождаются от большого объема монотонной деятельности – промывания, закапывания и остальной рутины, но не все лечебные учреждения могут себе позволить такую дорогостоящую аппаратуру

Поэтому многие больницы и диагностические заведения продолжают осуществлять ИФА по старинке – на полуавтоматах.

Интерпретация материалов исследования исключительно компетенция специалиста лабораторной диагностики – только ему могут рассказать результаты о специфике и тонкостях протекания заболевания. При этом врач должен обязательно учесть возможность получения ложноотрицательных или ложноположительных ответов.

Расшифровка материалов

Итогом качественной иммуноферментной диагностики должно стать однозначное заключение – найден искомый микроорганизм или нет в данном образце крови. Количественный анализ будет указывать на уровень концентрации и может выражаться двумя способами – значением в цифрах либо количеством знаков «+».

Анализируемые показатели

В процессе исследования производится тщательное изучение основных иммуноглобулинов, вовлеченных в иммунный ответ, таких как:

• IgM – обнаружение данного класса означает развитие острой формы инфекционного заболевания. Отрицательный результат по поиску IgM может быть как свидетельством отсутствия искомого возбудителя, так и перехода болезни в хроническое течение.
• IgА – определение этого класса при отсутствии IgM в большинстве случаев сигнал о хронической либо скрытой форме развития инфекционной болезни.
• IgM и IgА (одновременное наличие) – положительные результаты на оба вида свидетельствует о самом пике острой формы патологии.
• IgG – его наличие указывает на трансформацию заболевания в хроническую форму либо на выздоровление и формирование иммунитета к определяемому агенту.

Появление и накопление определенного класса ИГ происходит на разных временных этапах. Так, к примеру, первыми появляются IgM, приблизительно на 5 день от попадания возбудителя. ИГ находятся в крови около 5–6 недель, и затем постепенно пропадают. В это время они доступны к определению посредством ИФА. Ориентировочно через 3–4 недели от начала болезни появляются IgG, которые впоследствии могут оставаться на протяжении нескольких месяцев. Но в анализе их не всегда удается обнаружить.

IgА образуются в крови в период 2–4 недели, при этом 20% их содержится в сыворотке, а 80% – в секрете слизистых оболочек. Как правило, эти иммуноглобулины пропадают на протяжении 2–9 недель, что свидетельствует об уничтожении возбудителя и выздоровлении больного. Если же ИФА все же показывает наличие IgА, то это сигнализирует о переходе процесса в хроническую форму.

Варианты результатов анализа

В зависимости от полученных данных, ответы ИФА могут быть выданы на бланке в виде таблицы с полным списком всех АТ и АГ и указанием положительной либо отрицательной реакции. В определенных ситуациях будет выведено количественное значение – резко положительный, положительный, слабоположительный или отрицательный результат. Второй вариант указывает на количество содержащихся АТ в изучаемом образце крови.

Варианты интерпретации материалов ИФА

Кроме вышеперечисленных значений, в процессе ИФА исследуется еще один количественный параметр – индекс авидности АТ, исчисляющийся в процентах. Он показывает, сколько длится заболевание – то есть чем выше показатель, тем больше времени идет развитие патологии.

Альтернативный способ ИФА

Иммуноферментный анализ крови – достаточно известная и распространенная диагностика. Возможно, о ней никогда и не слышали некоторые, но существует одна еще менее известная широкому кругу людей разновидность данного исследования, при котором берется образец не крови. Эта методика называется анализ кала на скрытую кровь, и во многих случаях она позволяет избежать дополнительных изнуряющих процедур, к тому же еще сопровождающихся неприятными ощущениями.

Анализ ИФА на скрытую кровь (молекулы гемоглобина) дает возможность обнаружить кровотечение органов пищеварительной системы, даже незначительное, признаки которого в стуле больного, как говорится, невооруженным глазом не найти. Иммуноферментный анализ скрытой крови в испражнениях человека за короткое время способен показать язвенную болезнь, полипоз, дивертикулез, опухоли, которые на ранних стадиях не сопровождаются определенной симптоматикой.

На сегодняшний день созданы тысячи разновидностей тест-систем иммуноферментной диагностики, которые предоставляют возможность находить АТ и АГ огромного списка патологий. Поэтому данный анализ применяется почти во всех отраслях медицины, для любой возрастной категории. А абсолютная безвредность позволяет прибегать к нему и при беременности, и для диагностики ослабленных пациентов.

Время от времени врачи назначают анализы ИФА что это такое знают далеко не все. ИФА расшифровку имеет следующую – иммуноферментный анализ крови. Такое исследование крови помогает понять, как организм борется с болезнями инфекционного спектра и продемонстрировать фазу заболевания. Иммуноферментное исследование помогает в оценке защитной деятельности крови, выявлении иммунодефицита при патологиях, связанных с инфекциями, гормональных проблемах и прочем.

Анализ крови ИФА работает с материалом, который забирается из вены. Кроме этого, доступно для исследования содержимое стекловидного тела, жидкость из спинного мозга, мазки из уретры или цервикального канала. Для иммуноферментного анализа ИФА у беременных женщин могут забирать жидкость, которой окружен плод.

При этом непосредственно кровь на ИФА может проверяться с использованием разных техник. Есть прямой, непрямой способ, конкуренция и блокировка. При заражении организма каким-то болезнетворным агентом, который именуется антигеном, иммунитет начинает вырабатывать специфические антитела, например, на гепатит. Эти антитела направлены на то, чтобы «разобраться» с чужеродными агентами. Что такое антитела? Это особые белки, которые могут вступать в связь с антигенами и образовывать комплексы иммунологической направленности, которые именуются антиген-антитело. Именно за обнаружение этих комплексов и отвечает ИФА диагностика. Чтобы выявить антиген, к полученному кровяному образцу добавляются антитела или выполняется обратная процедура.

ИФА положительный результат строится на реакции иммунитета и ферментов. Под действием первой агенты инфекций и клеточные элементы связываются, вторая помогает визуализировать результат первой. Иммунная реакция предполагает антительную и антигенную связку. В результате этого процесса и формируется комплекс иммунной направленности. Все клетки на своей поверхности имеют антиген. Иммунной клеткой осуществляется захват подозрительной, а антиген, который закреплен на поверхности, проходит процедуру сравнения с информацией, которая «загружена» в память. Если присутствует совпадения описания, то клетка возвращается восвояси, если же нет, то происходит связь, за создание которой отвечает антитело, которое крепится к поверхности.

Ферментативная реакция тем временем позволяет веществам преобразиться в новые. На материал выполняется воздействие ферментом. При этом ферментальное различие обеспечивается разными субстратами. Продукт, который стал следствием этой реакции, отправляется на определение количества возбудителя, определение которого основывается на плотности растворной окраски.

Особенности метода

Иммуноферментный анализ крови назначается, когда нужно диагностировать аллергию, болезни, имеющие вирусное происхождение. Есть и анализ ИФА на сифилис и целый ряд других инфекций, передача которых происходит при незащищенном половом контакте. Такая диагностика становится все более популярной в сравнении с ПЦР. Дело в том, что ПЦР предполагает работу с мазками. В отличие от ПЦР результаты ИФА могут быть получены при кровяных проверках.

Кроме этого, анализ крови методом ИФА может назначаться, когда нужно установить присутствие иммунодефицита, диагностировать онкологию, дать оценку тому, насколько эффективно лечение, определить гормональный уровень и пройти предоперационное обследование в комплексе.

Если сравнивать исследования методом ИФА, например, с ПЦР, то можно обнаружить целый ряд преимуществ. Основным является возможность полной диагностики даже на самых ранних стадиях развития. Кроме этого, результаты ИФА помогают в определении конкретной стадии заболевания, того, на каком уровне находится его развитие.

ИФА анализ в сравнении с ПЦР имеет более высокую эффективность, кроме того, сдавать его можно во время беременности, чтобы обнаружить ЗППП. Тот, кто сдал этот анализ, может узнать концентрацию ТТГ в сыворотке крови. Это очень важно, чтобы проверить, какова реакция щитовидной железы, присутствуют ли сбои в ее работе.

Дополнительными плюсами, впрочем, их имеет и полимеразная цепная реакция, является быстрота исследования, а значит, быстрое получение результатов. По достоинству оценивают врачи и точность результатов. Если речь идет о ЗППП, то уровень доходит до 98 процентов, как и в случае с концентрацией ТТГ.

Конечно, без недостатков не обходится. Однако в этом случае речь идет о косвенных особенностях теста. В частности, речь идет о том, что нельзя исключить возможные ошибки при определении норм. Иногда анализ, который сдавала абсолютно здоровая девушка, может продемонстрировать ложноположительный результат, или отрицательный в обратном случае. Однако классификация методов психологического исследования в большинстве случаев связывает такие недочеты с неправильной подготовкой или нарушением техники, с которой выполнялся забор материала.

Особенности выполнения

При ИФА анализе в большинстве случаев сдается кровь. Перед сдачей крови важно выдержать не менее чем восьмичасовое голодание, исключить прием ряда медицинских препаратов, которые оказывают влияние на результат анализа. Речь идет об антигистаминных медикаментах и гормональных препаратах, влияющих на работу щитовидки. Кроме этого, исключен должен быть алкоголь не менее чем за сутки. Обеспечьте отсутствие курения не менее чем за час до сдачи крови. Искажение результата возможно и при приеме наркотических веществ.

Прежде чем перейти к расшифровке, стоит упомянуть, какие способы измерения используются для такого теста. В результате анализа будут указываться антитела или иммуноглобулины Ig. Под ними понимаются те самые специфические белки, о которых ранее шла речь. За выработку их отвечают В-лимфоциты, как только в организм попадают вирусы, бактерии или грибки. Выделяется пять видов иммуноглобулинов, обозначающихся латиницей.

Отличия их связаны с разной молекулярной формой и массой. У них разный период полураспада, по-разному принимается участие или не принимается в инфекционных процессах. Варьируются и сроки, в рамках которых их можно обнаружить с момента, как произошло инфицирование.

Если классифицировать иммуноглобулины, используя в качестве основы молекулярный вес, то самые большие показатели у IgM. Особенностью такого типа иммуноглобулинов является отсутствие возможности прохождения через плацентарный барьер. Если IgM обнаруживается в анализе у новорожденного ребенка, речь идет о присутствии инфекции у плода.

В подавляющем большинстве в крови у человека содержатся иммуноглобулины IgG, меньше всего IgE. Говоря о работе в рамках инфекционных процессов, особенное значение стоит уделять вариантам A, M, G. IgE выступает в качестве маркера аллергической реакции. IgD обнаруживается только в тканях лимфоузлов и миндалин. Это важно с точки зрения создания иммунитета местного уровня.

Кроме этого, в анализе определяются антигены. Под ними понимаются вещества высокомолекулярного типа, которые известны своим органическим происхождением. В частности, речь идет о возбудителях заболеваний инфекционного и другого спектра. Кроме этого, имеются в виду и вещества, сигнализирующие о различных изменениях клеток, которые неизбежны при целом ряде болезней. Также указывается и иммунный комплекс, который демонстрирует комплекс антиген-антитело, которым принимается участие в иммунном процессе.

Обычно сроки изготовления зависят от конкретной лаборатории, в которую вы обратились. Ряд лабораторий в состоянии предоставить результаты в течение дня-двух, другим требуется неделя. Задержки могут быть связаны с необходимостью накопить определенное количество сыворотки.

Влияние на результаты и расшифровка

Несмотря на то, что ИФА считается одним из наиболее точных методов проверки, погрешности все-таки встречаются. Повлиять на правильность результатов может процедура взятия материала, неправильная его транспортировка и хранения материала. Прием медикаментов, как уже указывалось выше, присутствие скрытых заболеваний. Нарушение обмена веществ или иммунодефицит тоже не позволят получить верные показатели. В период жизни до года у новорожденных тоже могут быть не совсем верные показатели. Связано это с тем, что в организме присутствуют материнские антитела.

Говоря о расшифровке, в бланках анализа используется положительный или отрицательный знак, которым обозначаются результаты вычисления по каждому из иммуноглобулинных классов. В качестве вероятных вариантов будут выступать следующие.

Отсутствие обнаруженных IgG, IgA и IgM говорит о полном выздоровлении. Отрицательный результат по таким компонентам как IgM, IgA, IgG – это отсутствие иммунитета к инфекции.

Сочетание положительного и отрицательного результата по IgG, IgA в комплексе с положительным IgM говорит о присутствии в организме инфекции в острой форме. Положительный результат IgG комбинируемый отрицательными показателями по IgA и IgM соответствует поствакцинальному периоду или приобретению иммунитета в результате перенесенной инфекции.

Сочетание положительного или отрицательного результата IgG, IgA и отрицательного результата, IgM говорит о присутствии инфекции в хроническом ее течение. Положительный результат по трем компонентам: IgG, IgM, IgA обозначает обострение инфекции, которая находилась в хронической форме протекания. Кроме непосредственно уточнения антителовых классов, в рамках расшифровки анализа ИФА врач получает информацию об их количественных показателях. Важно подчеркнуть, что за расшифровку должен отвечать именно лечащий врач. Дело в том, что сочетание некоторых компонентов может натолкнуть его на мысль о полученном ложном результате, что приведет к повторной сдаче. Самостоятельная расшифровка в таком случае бесполезна.

Иммуноферментный анализ крови – метод диагностики, который практикуется для выявления гельминтов у детей и взрослых.

Показание к проведению

Врачи назначают выполнение ИФА на инвазию в следующих случаях:

• число лейкоцитов у пациента существенно превышает норму при отсутствии симптоматики других патологий;
• беспокоят частые головокружения или головные боли без очевидных причин;
• возникают аллергические реакции;
• одолевают мышечные боли, упадок сил;
• долго не излечивается кашель;
• временами появляется лихорадочное состояние;
• у домашних животных выявляется наличие глистов;
• в регионе проживания ухудшается эпидемиологическая ситуация;
• профессия пациента связана с высоким риском заражения глистами (проводится плановая диагностика).

• расстройства пищеварения с изменением стула и его периодичности;
• боли в животе;
• колики в области печени;
• тошнота, переходящая в рвоту;
• признаки поражения центральной нервной системы: бессонница, повышенная нервозность, резкие перепады настроения.

Виды ИФА

Ферментативная реакция позволяет изучать установленные лаборантами виды гельминтов с визуальным измерением данных о них.

В лабораториях практикуются различные виды ИФА:

Как сдавать

Чтобы результаты исследования оказались максимально достоверными, следует неукоснительно выполнять все требования лаборатории. Необходимо:

• за 3 суток до сдачи крови прекратить прием всех медикаментов, кроме жизненно необходимых;
• за 2 суток приостановить физиотерапевтические процедуры;
• за 1 сутки отказаться от алкоголя и кофе;
• накануне не подвергаться физическим нагрузкам и эмоциональным стрессам;
• поужинать не позднее 19-20 часов (утром можно выпить немного воды).

Расшифровка

Вариант №1. IgM-, IgA+, IgG-: первичное заболевание (2 недели с момента инфицирования).

Вариант №2. IgM+, IgA+, IgG-: первичная болезнь (2,5-3 недели со времени заражения).

Вариант №3. IgM+, IgA+, IgG+: первичная инфекция (3-4 недели с момента заражения).

Вариант №4. IgM-, IgA+, IgG+: обострение хронической болезни (2 недели от начала обострения).

Вариант №5. IgM-, IgA+/-, IgG+: хроническая фаза.

Вариант №6. IgM-, IgA-, IgG+: вылеченная (прошедшая) инфекция, наличие иммунитета.

Вариант №7. IgM-, IgA, IgG не определяются (или снижение титра в 2-4 раза по окончании лечения, в 5-8 раз через 1-1,5 месяца после лечения): выздоровление.

Вариант №8. IgM-, IgA-, IgG-: отсутствие иммунитета к инфекции.

Преимущества и недостатки

Крайне редко тест выдает ложноположительные или ложноотрицательные результаты. Причинами этого недостатка могут оказаться технические ошибки. Такие результаты возможны при ревматоидном факторе, при нарушениях обмена веществ и других хронических заболеваниях, вследствие которых вырабатываются защитные антитела, а также при приеме некоторых препаратов, например инсулина.

Методом ИФА определяются:

• ленточные черви (свиные цепни);
• круглые черви (аскариды, острицы, токсокары, стронгилоидиты);
• плоские черви (цестоды, сосальщики, нематоды);
• трихинеллы;
• к аскаридам – 935 руб.;
• к токсоплазмам – 715-1000 руб.

Метод иммуноферментного анализа является современным методом лабораторного исследования крови на присутствие в ней антител к вирусам и антигенов к возбудителям болезни. Этот метод способен не только выявить этиологию, но еще и определить стадию заболевания. Результаты анализа имеют качественный и количественный показатель.

Для чего проводиться иммуноферментный анализ:

• обследования крови() на присутствие в ней аутоиммунных болезней;
• обследование больного на онкомаркеры;
• возможность исследовать гормональный состав крови;
• поиск антигенов к инфекционным и венерологическим болезням;
• поиск антител к вирусным инфекциям.

Преимущества иммуноферментного анализа состоят в том, что он гарантирует высокий уровень специфичности результатов и имеет высокую чувствительность (больше 90 %) к возбудителям инфекций. ИФА является доступным методом диагностики, который выполняют в каждом медицинском центре. Также, с помощью такого метода можно определить не только заболевание, но и следить за процессом его развития, сравнивая количество выработанного в крови белка, в разные промежутки время.

Единственным недостатком ИФА, пожалуй, является то, что с его помощью нельзя определить возбудителя инфекции, а можно только выявить иммунный ответ на этот возбудитель.

Основные термины иммуноферментного анализа (ИФА)

Сначала разберемся с некоторыми понятиями, чтобы разобраться в принципе проведения лабораторного исследования.

Иммунный комплекс – это комплекс антител и антигенов, присутствующих в крови, и участвующих в иммунном процессе.

Антигены – это вещества, которые имеют органическое происхождение и образовываются в результате той или иной болезни в клетках организма. Причиной этому может стать аутоиммунное или онкологическое заболевание. Также, антигенами могут быть вещества различных возбудителей инфекционных заболеваний.

Авидность антител - это показатель прочности связи между антигеном и антителом, а также количество антигена, которое вступило в связь с антителами (иммуноглобулинами).
Это очень важный показатель, поскольку с его помощью можно определить дату инфицирования человека, что очень важно при заражении на протяжении срока беременности.
Тест на авидность проводится в лабораторных условиях путем обработки комплекса антитело-антиген мочевиною, что разрушает белок. При этом, соединения с низкой авидностью разрушаются, а соединения, имеющие высокую авидность остаются неповрежденными. Результаты теста на авидность выражаются в процентном соотношении.

Антитела (иммуноглобулины) – это специальный белок, который вырабатывают лимфоциты, то есть иммунные клетки, при попадании в организм человека бактерий, вирусов или грибов (инфекционного патогена).
Существуют иммуноглобулины пяти видов: A, E, M, G, D. Они отличаются друг от друга массой, формой, участием в инфекционном процессе, периодом полураспада, сроками образования с момента заражения.
Самый большой молекулярный вес имеет иммуноглобулин IgM (пентамер), он весит 950000 дальтон, в то время как остальные имеют вес в пределах 150 – 200 000 дальтон. Из-за своих размеров IgM не проходят через плацентарный барьер. В сыворотке из крови основную массу занимают иммуноглобулины IgG, их процентное соотношение занимает приблизительно 80 %. А самую малую часть в сыворотке занимают антитела IgE – 0,003%. В инфекционном процессе участвуют иммуноглобулины IgG, IgМ, IgА. В то время, как IgE являются результатом аллергических реакций. Такие белки как IgD принимают участие в формировании местного иммунитета и образовываются в лимфоузлах и миндалинах.

Существует несколько видов ИФА, среди них прямой, непрямой, конкурентный и метод блокирования. Хотя на практике, лаборанты чаще всего используют твердофазный гетерогенный иммунный анализ, который называется ELISA (enzyme linked immunosorbent assay).

Принцип проведения иммуноферментного анализа проявляется в реакции антитела и антигена, при которой образовывается иммунный комплекс – антиген-антитело. Такая реакция приводит к тому, что ферментная активность меток на поверхности антител изменяется.

Чтобы разобраться в этом, рассмотрим этот процесс поэтапно.

Первый этап. На этом этапе лаборант, проводящий исследование, размещает на поверхность лунок планшета очищенный антиген инфекционного возбудителя. Затем, к возбудителю добавляют сыворотку крови больного, что провоцирует специфическую реакцию между антителом в крови и антигеном. Это полученное соединение и участвует в следующем этапе эксперимента.

Второй этап. На втором этапе исследования происходит образование иммунных комплексов, которые являются реакцией между антигеном, полученным на первом этапе, и конъюгатом, то есть иммуноглобулином, помеченным ферментом пероксидазы. При этом добавляется специфический хромоген. В результате реакции получается окрашенное соединение в лунке. Интенсивность цвета при этом зависит от количества иммуноглобулинов, содержащихся в крови пациента.

Третий этап. На третьем этапе лаборанты обычно занимаются оценкой результатов исследования. Для этого проводится фотометрирование с использованием спектрофотометра, сравнение плотности биологического материала с плотностью проб, также, проводится математический подсчет результатов. Уровень иммуноглобулинов в крови зависит от плотности лунки планшета.
В практике чаще всего применяют 96 луночные планшеты.

Когда происходит измерение оптической плотности (сокращенно ИП) крови, то проводят подсчет антител в одной единице объема. После чего полученный результат сравнивают с контрольным материалом.
Важно помнить о том, что для каждого метода исследования устанавливаются свои показатели, с помощью которых учитываются референтные значения теста. Это показатели патологий и норм. Поэтому, нужно помнить об этом в каждом конкретном случае. Нельзя проводить интерпретацию результатов одного исследования в иное. Также, нельзя и сравнить результаты отдельно взятых лабораторий.

Заболевания выявляющиеся ИФА диагностикой

С помощью иммуноферментного анализа, можно выявить наличие в организме таких заболеваний:

1) Инфекционные болезни

2) Показатели состояния человеческого иммунитета и маркеры аутоиммунных болезней.
3) Онкологические заболевания (хронический гонадотропин, простатспецифический антиген, альвеомуцин, фактор некроза опухоли, раково-эмбриональный антиген и другие).
4) Эндокринные заболевания.
5) Нарушения работы репродуктивной системы.

В список включены не все заболевания, которые могут быть диагностированы с помощью ИФА, этот перечень можно продолжать.

Исследования

Забор материала для исследования методом иммуноферментного анализа.

Для исследований методом ИФА у пациентов могут быть взяты спинномозговое вещество, жидкость стекловидного тела, околоплодные воды, слизь, выделенная из цервикального канала или уретры, а также мазки. Но самым распространенным образцом для исследований является все же кровь пациента.

Результаты иммуноферментного анализа обычно изготавливаются в течение суток. Задержек происходить не должно, хотя при больших скоплениях сывороток, лаборанты могут просто не успеть сделать анализ вовремя.

Результаты исследований

Оценивая результаты проведенных исследований на выявление каких-либо инфекций, особое значение имеет количество иммуноглобулинов, обнаруженных в крови, а также, их вид. От этих показателей зависит присутствие в организме инфекции или же ее отсутствие. Также, сравнив количественные и качественные показатели, лаборант может определить предполагаемую стадию развития болезни, а также отличить острую форму заболевания от хронической формы. Оценивают также и наличие в организме человека активного вируса, что проявляется при обостренной хронической или острой форме заболевания.
Приблизительное время, через которое происходит появление в крови иммуноглобулинов Ig.

Дело в том, что IgМ являются самыми быстро появляющимися антителами. Обнаружение их происходит уже через 1 – 3 недели после процесса инфицирования организма, это является признаком острой фазы заражения вирусом человека.

Также, подобные антитела можно обнаружить в крови пациента при обострении протекания хронической болезни. Количество антител IgМ сохраняется около 3 месяцев с момента их образования, потом они постепенно начинают исчезать. Хотя случаются и исключения. Например, некоторые пациенты после окончательного выздоровления сохраняют количество антител в своей крови. Так, циркуляция иммуноглобулинов проходит через несколько лет после заражения.

У таких пациентов необходимо проверять положительные показатели на присутствие IgМ антител, поскольку возможны ситуации, когда система тестирования допускает ошибку и выдает ложно положительный результат. Такие ситуации очень часто случаются с беременными женщинами.

Что же касается появления антител IgA, то они способны образоваться через 2 или 4 недели после того, как организм подвергся действию инфекции. Но обнаружить антитела можно только через месяц. Именно тогда количество их достигает оптимального для выявления числа.

Антитела IgA вырабатываются клетками лимфоузлов, селезенки, а также слизистых оболочек. Подобные иммуноглобулины способны концентрироваться на поверхностях слизистых оболочек органов, где и выполняют свою защитную функцию, участвуя в местном иммунитете человека.

Появление антител IgG прослеживается тестирующими системами уже на 4 неделе прогрессирования инфекционного процесса в организме. Титр таких иммуноглобулинов постепенно может увеличиваться в течение 2 месяцев. После выздоровления небольшой их титр сохраняется в организме и поддерживает иммунитет. Такие болезни как хламидиоз, трихомониаз и микоплазмоз характеризируются невысоким уровнем антител IgG в крови, что объясняется отсутствием стойкого иммунитета к таким инфекциям.

Классы

Варианты выявления в крови человека иммуноглобулинов разных классов.

• Выявление антител IgM, которое проводится изолированно, свидетельствует о первичном инфицировании человека.
• Обнаружение в сыворотке крови одновременно антител класса IgM и IgG происходит также при первичном инфицировании, произошедшем в последние 2-3 месяца. Или же такое сочетание может быть признаком обострения хронического заболевания.
• Таким образом, такие результаты при беременности не всегда говорят о первичном заражении.
• Обнаружение изолированно антител класса IgG может быть признаком иммунитета к данной инфекции, хотя также это может указывать и на хроническую болезнь. При наличии хронической формы заболевания большую роль играет количество антител и их динамика. Такие исследования проводят с интервалом примерно в 2 недели.
• Когда в крови присутствуют сразу антитела IgA и IgM, то это может говорить о первичном инфицировании. Обнаружение IgA изолированно тоже является последствием первичного поражение инфекцией организма.

При обнаружении антител IgA вместе с антителами IgG означает активацию хронической формы инфекции. Иммуноглобулины появляются в крови через 2 недели после обострения болезни.
Авидность антител является показателем прочности связи между антигеном и антителом, а также количество антигена, которое вступило в связь с антителами (иммуноглобулинами). Это дополнительный этап в диагностике методом ИФА.

Это очень важный показатель, поскольку с его помощью можно определить дату инфицирования человека, что очень важно при заражении на протяжении срока беременности. А также, можно оценить все риски внутриутробного инфицирования ребенка.

Тест на авидность проводится в лабораторных условиях путем обработки комплекса антитело-антиген мочевиною, что разрушает белок. При этом, соединения с низкой авидностью разрушаются, а соединения, имеющие высокую авидность остаются неповрежденными. Результаты теста на авидность выражаются в процентном соотношении. Высокая авидность антител свидетельствует о хронической форме болезни, либо же является признаком стойкого иммунитета.

Особенности появления антител в крови грудных детей

Если у детей в возрасте до года или до 1,5 лет в крови обнаружены материнские IgG, то это значит, что антитела проникли в организм ребенка через плаценту во время вынашивания плода. Этот признак не может свидетельствовать об инфицировании малыша, а является передавшемся от матери иммунитетом к инфекции.

Но, если в маленьком организме обнаружено иммуноглобулины класса IgM, которые из-за своего веса не могут проникнуть через плаценту к малышу, то это является признаком инфицирования. Заражение могло произойти уже после рождения или же в период внутриутробного развития.

Количественный метод иммуноферментного анализа .

Результат диагностики заболеваний методом ИФА представлен в определенных единицах измерения:

1. ОП – оптическая плотность образца – это уровень концентрации антител в одной единице объема. Чем выше этот показатель, тем больше находится иммуноглобулинов в крови.
2. Некоторые результаты ИФА подразумевают наличие такой единицы как коэффициент позитивности – КП. Это тоже обозначение плотности образца.
3. Единицы концентрации иммуноглобулинов выражены в нанограммах, миллилитрах или же в нг/мл.
4. Титры сывороток крови выражены так: 1:20, 1:40, 1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1200 и тому подобное.
5. Титры, при которых происходит диагностирование заболевания для разных инфекций разные.
6. В результатах исследования присутствуют такие символы: «-», «+»,«?» (+, ++, +++, ++++).
7. Качественная же оценка подразумевает наличие только одного пункта из двух: положительно либо отрицательно.

Правильность интерпретации результатов данного исследования зависит от квалификации врача, поскольку кроме специалиста никто не имеет права назначать лечение.

Специалисты оценивают количество антител в крови, их вид и концентрацию.

Также, необходимо помнить о том, что нельзя сравнивать результаты разных методов исследования, либо же результаты тестов, полученные в разных лабораториях. Поскольку для любого метода диагностики существуют свои показатели и единицы измерения.

Сравнивание результатов допустимое только в пределах одной и той же лаборатории.

Видео метода иммуноферментного анализа ИФА

В современной лабораторной диагностике инфекционных болезней широкое применения нашел метод иммуноферментного исследования крови (ИФА), основанный на обнаружении специфических, характерных для возбудителей антител.

В чем суть метода?

Чтобы это понять, следует знать, как работает иммунная система человека, что такое антиген, антитела, какие функции они выполняют.

• Антиген в нашем организме представляет собой молекулу, которая специфично связывается с антителом. Он переносит определенную информацию о клетке.
• Когда в кровь попадает чужеродный антиген, начинают вырабатываться антитела (иммуноглобулины Ig), которые распознают его и стремятся уничтожить.
• Такое взаимодействие называется иммунным комплексом, на котором и основан метод диагностики ИФА.
• Анализ позволяет определить уровень гормонов, иммуноглобулинов, иммунологических комплексов и других биологически активных веществ, поэтому важен для комплексной диагностики .

Кому показана диагностика?

Специалист может назначить исследование с целью:

По сравнению с другими методами исследования ИФА обладает целым рядом преимуществ:

Задайте свой вопрос врачу клинической лабораторной диагностики

Анна Поняева. Закончила нижегородскую медицинскую академию (2007-2014) и Ординатуру по клинико-лабораторной диагностике (2014-2016).

Из недостатков можно отметить возможную неточность расшифровки . Иногда анализ показывает ложноотрицательный или ложноположительный результат, особенно при неправильной подготовке или нарушении техники выполнения.

Как выполняется?

Процедура ничем не отличается от взятия материала для .

• После назначения анализа пациент направляется в лабораторию для забора венозной крови. Процедура проводятся утром на голодный желудок.
• Материал отправляется в лабораторию, где из крови получают сыворотку, в которой находятся антитела.
• Сыворотку помещают в пробирки с наборами антигенов. В практике таких наборов применяется много. Это могут быть разные аллергены (пыльца, шерсть, цитрусовые, молоко и другие), возбудители инфекционных и вирусных заболеваний и другие.
• После получения реакции остатки сыворотки сливают. Количество антител определяют при помощи специальных индикаторов.

Сроки изготовления анализа

Срок выполнения зависит от конкретной лаборатории. Некоторые лаборатории предоставляют результаты в течении 1-2 дней , другие в течение 1 недели. Задержки могут быть из-за накопления определенного количества сывороток.

Подготовка к исследованию

Перед сдачей анализа следует придерживаться простых правил подготовки:

• Исключить прием любых медикаментозных средств накануне анализа. Если это невозможно, обязательно поставьте в известность врача, назначающего диагностику. Особое внимание уделяется лекарствам от аллергии. Если пациент принимает антигистаминные препараты, следует проконсультироваться с врачом, за сколько до начала исследование нужно их отменить. Это касается и некоторых лекарств для щитовидной железы. Иначе концентрация ТТГ может быть определена неправильно и результат нормы и патологии будет получен неверно. Как правило, в норме антибактериальные, противовирусные, антигистаминные препараты прекращают принимать за 10-16 дней до диагностики .
• Кровь забирается строго натощак . Последний прием пищи в норме должен быть за 8-12 часов до поездки в лабораторию.
• Нельзя принимать алкогольные напитки и курить, иначе это повлияет на норму результатов.
• Следует исключить любые стрессовые факторы, физические нагрузки. Обязательно хорошо выспаться.

Все, что вам необходимо знать про анализ на примере одной из лабораторий

Что может повлиять на результаты?

Анализ ИФА — достаточно точный метод исследования. Погрешности возникают в случаях:

• нарушении процедуры взятия материала;
• при неправильной транспортировки и хранении материала;
• во время приема некоторых медикаментозных средств (препараты для щитовидной железы, например, которые могут повлиять на концентрацию ТТГ);
• при наличии скрытых заболеваний (в том числе ЗППП, хламидии, например), нарушениях обмена веществ, иммунодефиците;
• в период новорожденности, когда в норме в организме присутствуют еще материнские антитела.

Расшифровка, значения (нормы и патологии)

Когда анализ будет готов, пациент получает бланк, где указываются отрицательные (-) и положительные (+) результаты определения каждого класса иммуноглобулинов. Интерпретация может быть такая:

• На выздоровление пациента указывают отрицательный результат IgM , без определения IgA, IgG.
• Хроническое инфекционное заболевание подразумевает расшифровка: (-) IgM и отрицательный, положительный IgG, IgA.
• Об отсутствии защитной реакции к инфекциям указывают (-) значения IgM, IgG, IgA.
• Острая инфекция обнаруживается при отрицательном или положительном IgG и IgA, (+) IgM.
• Постинфекционный иммунитет при (-) IgM, IgA и положительном значении IgG.
• Обострение хронического заболевания — (+) показателях IgM, IgG, IgA.

Наглядная демонстрация ИФА анализа

Где сделать?

Анализ крови методом ифа считается востребованной диагностикой и предлагается различными лабораториями, клиниками города.

В Москве анализ ИФА можно сделать:

• в лаборатории Ниармедик,
• Инвитро,
• Царской клинике,
• Дельтаклинике,
• ЛДЦ Кутузовском,
• МедЦентрСервисе,
• сети Онклиник,
• Чудо докторе,
• Семейном докторе,
• К+31,
• ООО Медицине и других.

В Санкт-Петербурге анализ ИФА проводится

• в Мэдисе,
• Американской медицинской клинике,
• Клинике доктора Филатова,
• Medem,
• Клинике Доктора Пеля,
• Лека-Фарм,
• Инклиник,
• Экспрессе и других.

Очень полезный учебный фильм про анализ ИФА

Стоимость исследования

Складывается от количества нужных маркеров. Чем больше маркеров, тем выше цена.

Цена на определение антител к

• цитомегаловирусу Igm/IgG варьируется в пределах 350-700 рублей,
• к микоплазме 340-520 рублей,
• к кандиде 320-450 рублей,
• Анти-Хламидия tr. IgA + Анти-Хламидия tr. IgG 1000-1300,
• антитела класса IgM к Хламидии 500-600 рублей и т.д.
• Забор крови в среднем составляет 150-250 рублей.

Некоторые клиники и лаборатории предоставляют услугу отправки результатов по электронной почте. Услуга бесплатна.